Патенты автора Леонов Вячеслав Сергеевич (RU)
Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способам выделения и очистки рекомбинантных белков, в частности к получению высокоочищенного препарата рекомбинантной нейраминидазы NanH. Получение активного, хроматографически гомогенного с низким содержанием бактериальных эндотоксинов и ДНК хозяина препарата NanH в промышленных масштабах достигается благодаря схеме хроматографической очистки, включающей в себя металлохелатную хроматографию и разделяющую хроматографию. Нейраминидазу NanH получают на основе оптимизированной синтетической последовательности ДНК, без удаления содержащейся на N-конце рекомбинантного белка короткой последовательности из шести гистидинов, что позволяет упростить очистку и удалить из схемы очистки применение дорогостоящего препарата тромбина. Уже на первой стадии металлохелатной хроматографии происходит максимальная очистка целевого белка от контаминирующих примесей клеточных белков. Изобретение позволяет получить более высокий, по сравнению с применяемыми ранее способами, выход целевого белка: не менее 1,0 г с 1 л культуральной жидкости. 8 з.п. ф-лы, 9 ил., 5 табл., 9 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии и решает задачу получения в промышленных объемах высокоочищенной ферментативно активной рекомбинантной β-1,4-галактозидазы BgaA, пригодной для использования на стадии ремоделирования для получения терапевтически функциональных препаратов гликопротеинов с заданными свойствами, для разработки инструментов для высокочувствительного анализа гликановых цепей гликопротеинов тканей растений, животных и микроорганизмов. Способ предусматривает применение металлохелатной, псевдоаффинной, гидрофобной, анионобменной, концентрирующей хроматографии с последующей полирующей гель-фильтрацией, при этом белок из растворимой фракции клеточного лизата очищают с помощью двух стадий хроматографии на одном и том же Ni2+ металлохелатном сорбенте в различных условиях элюции и псевдоаффинной хроматографией в режиме проскока на Blue Sepharose. Применение вышеуказанных трех стадий помогает максимально очистить препарат от мажорных контаминирующих примесей. 9 з.п. ф-лы, 8 ил., 3 табл., 6 пр.
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РЕКОМБИНАНТНОЙ БЕТА-N-АЦЕТИЛГЛЮКОЗАМИНИДАЗЫ STRH ИЗ STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE // 2693660
Изобретение относится к биотехнологии. Предложен промышленный способ получения биологически активного препарата рекомбинантной экзо-бета-N-ацетилглюкозаминидазы StrH (β-N-GlcNAcase StrH), продуцированного в соответствии с правилами GMP. Способ включает последовательные стадии металлохелатной хроматографии для сорбции целевого белка с гексагистидиновым тэгом; гель-фильтрации в режиме проскока для очистки целевого белка от контаминирующих примесей клеточных белков, коэлюирующихся с целевым белком на всех стадиях; анионобменной хроматографии на сорбенте, оптимизированным для захвата и очистки белков с большим молекулярным весом; гидрофобной хроматографии, где проводят очистку от контаминирующих примесей гидрофобных белков и бактериальных эндотоксинов. Способ пригоден для использования на стадии ремоделирования в получении терапевтически функциональных препаратов гликопротеинов с заданными свойствами, а также для разработки инструментов для высокочувствительного анализа гликановых цепей гликопротеинов тканей растений, животных и эукариотических микроорганизмов. 8 з.п. ф-лы, 8 ил., 7 табл., 8 пр.
Группа изобретений относится к вариантам способа микробиологического синтеза гибридного белка E7-HSP70. Синтез белка E7(6)-HSP70, E7(11)-HSP70, E7(16)-HSP70 или E7(18)-HSP70 осуществляют путем культивирования соответственно штамма дрожжей Saccharomyces cerevisiae ВКПМ Y-3919, штамма дрожжей Saccharomyces cerevisiae ВКПМ Y-3853, штамма дрожжей Saccharomyces cerevisiae ВКПМ Y-4057 или штамма дрожжей Saccharomyces cerevisiae ВКПМ Y-4058 в подходящих условиях на среде, содержащей в качестве источника углерода сахарозу. Процесс культивирования осуществляют в две фазы. Первую фазу осуществляют при температуре 25-26°C и начальной концентрации сахарозы 25-30 г/л. По достижении концентрации сахарозы в среде 15 мг/л проводят вторую фазу процесса культивирования, на которой температуру снижают и поддерживают на уровне не более 23°C, значение pH поддерживают на уровне 5,7-5,9, а концентрацию сахарозы поддерживают путем экспоненциальной подпитки на уровне 15 мг/л. Группа изобретений обеспечивает получение целевого продукта в количестве не менее 550 мг/л и позволяет осуществлять процесс культивирования в течение не более 65 ч. 4 н.п. ф-лы, 12 ил., 4 пр.
Изобретение относится к области микробиологии и биотехнологии и касается оптимизации процессов культивирования штамма-продуцента Е.coli, а точнее способа получения культуры клеток штаммов Е.coli, полученных на основе штамма BL21(DE3)
