Патенты автора ТИМ Ларс (DK)

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению молекулы Фактора VIII с укороченным В-доменом и ковалентно конъюгированной с гидрофильным полимером, имеющей измененное время полужизни в кровотоке, и может быть использовано в медицине для лечения гемофилии. Получают молекулу предшественника Фактора VIII с укороченным В-доменом, где В-домен соответствует аминокислотам 741-761 из SEQ ID NO 2. При этом указанная молекула ковалентно конъюгирована с ПЭГ или полисахаридом размером 10-80 кДа посредством О-связанного олигосахарида по сериновому остатку в укороченном В-домене, который соответствует аминокислоте 750 в SEQ ID NO 2. Изобретение позволяет увеличить время полужизни Фактора VIII в кровотоке. 5 н. и 3 з.п. ф-лы, 8 ил., 4 табл., 7 пр.

Способ очистки белка Фактора свертывания VIII из раствора включает: а) контактирование белка с мультимодальной смолой или смолой смешанного типа действия, содержащей лиганды, которые включают гидрофобную часть и отрицательно заряженную часть; b) элюцию белка элюирующим буфером, содержащим по меньшей мере 1,5 М соли и по меньшей мере 40% (вес/объем) этиленгликоля, пропиленгликоля или их смеси и ионы кальция. Способ представляет собой одностадийный хроматографический процесс, при котором происходят захват и очистка белка Фактора свертывания VIII, не требующий доведения рН или электропроводности в ходе стадии загрузки. Способ стабилизации белка Фактора свертывания VIII, при котором происходят захват и стабилизация белка Фактора свертывания VIII за один проход белка через колонку с мультимодальной смолой, содержащей лиганды, которые включают гидрофобную часть и отрицательно заряженную часть, и элюция белка элюирующим буфером, содержащим по меньшей мере 1,5 М соли и по меньшей мере 40% (вес/объем) этиленгликоля, пропиленгликоля или их смеси и ионы кальция. Изобретение обеспечивает сокращение объема колонки примерно в 250 раз и «коэффициент очистки», по меньшей мере равный 30, высокий показатель стабильности для белкового продукта. 2 н. и 14 з.п. ф-лы, 4 ил., 4 табл., 7 пр.

 


Наверх