Патенты автора Верещагина Юлия Витальевна (RU)
Изобретение относится к области биотехнологии растений, предполагает использование метода культуры растительной ткани для микроклонального размножения лекарственного вида Stephania glabra. Способ осуществляют следующим образом: из первичного экспланта на жидкой питательной среде культивируют гетерогенную культуру, после чего полученную гетерогенную клеточную культуру культивируют на питательной среде для образования соматических зародышей с последующим формированием из полученных соматических зародышей микрорастений на питательной безгормональной твердой среде. В качестве первичного экспланта используют молодые листья растения Stephania glabra, которые предварительно стерилизуют в ламинарном боксе в 0,1-0,2% растворе диацида в течение 3-5 минут и после тщательной промывки в 5-ти сменах стерильной воды культивируют не менее 3-х пассажей на питательной среде для получения гетерогенной культуры на орбитальной качалке с 14-суточными интервалами в темноте при температуре 25°C и относительной влажности 50-70%. Жидкую питательную среду для получения гетерогенной культуры (W2,4D жидкая) готовят на основе макро- и микросолей по прописи Мурасиге и Скуга с уменьшенным содержанием нитрата аммония (NH4NO3) до 400 мг/л. В результате, она содержит, мг/л, соответственно: 400 - NH4NO3, 1900 - KNO3, 170 - KH2PO4, 440 - CaCl2 2H2O, 370 - MgSO4 7H2O, 37,3 - Na2EDTA 2H2O, 27,8 – FeSO4 7H2O, 6,2 - H3BO3, 22,3 - MnSO4 4H2O, 0,025 - CuSO4 5H2O, 0,025 - CoCl2 2H2O, 8,6 - ZnSO4 7H2O, 0,25 - Na2MoO4 2H2O, 0,83 – KI, 100 - мезоинозит, 100 – пептон, 0,5 – никотиновая кислота, 0,5 - пиридоксин гидрохлорид, 0,2 - тиамин гидрохлорид, 1 - цистеин, 25000 – сахароза и 0,5 - 2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота. В качестве питательной среды для образования соматических зародышей используют питательную среду, которая содержит, мг/л, соответственно: 400 - NH4NO3, 1900 - KNO3,, 170 - KH2PO4, 440 - CaCl2 2H2O, 370 - MgSO4 7H2O, 37,3 - Na2EDTA 2H2O, 27,8 – FeSO4 7H2O, 6,2 - H3BO3, 22,3 - MnSO4 4H2O, 0,025 - CuSO4 5H2O, 0,025 - CoCl2 2H2O, 8,6 - ZnSO4 7H2O, 0,25 - Na2MoO4 2H2O, 0,83 – KI, 100 - мезоинозит, 100 – пептон, 0,5 - никотиновая кислота, 0,5 - пиридоксин гидрохлорид, 0,2 - тиамин гидрохлорид, 1 - цистеин, 25000 - сахароза, 0,5 - 6-бензиламинопурин и 2,0 - α-нафтилуксусная кислота, культивирование ведут не менее 2-х пассажей с 20-суточными интервалами на орбитальном шейкере в темноте при температуре 25°С и относительной влажности воздуха 50-70%. Затем сформированные соматические зародыши для доращивания и регенерации полноценных микрорастений в количестве 30-50 штук на колбу помещают в 100 мл колбы Эрленмейерана на безгормональную твердую питательную среду и доращивают на свету в течение не менее 4-х недель (Фиг. Б) до формирования отдельных микрорастений, при этом безгормональная твердая питательная среда включает, мг/л, соответственно: 400 - NH4NO3, 1900 - KNO3, 170 - KH2PO4, 440 - CaCl2 2H2O, 370 - MgSO4 7H2O, 37,3 - Na2EDTA 2H2O, 27,8 – FeSO4 7H2O, 6,2 - H3BO3, 22,3 - MnSO4 4H2O, 0,025 - CuSO4 5H2O, 0,025 - CoCl2 2H2O, 8,6 - ZnSO4 7H2O, 0,25 - Na2MoO4 2H2O, 0,83 – KI, 100 - мезоинозит, 100 – пептон, 0,5 - никотиновая кислота, 0,5 - пиридоксин гидрохлорид, 0,2 – тиамин гидрохлорид, 1 - цистеин, 25000 - сахароза, 7000 – агар. В заявленном способе весь процесс от этапа получения первичного каллуса из листового экспланта до высадки сформированных микрорастений в грунт занимает не более 21-24 недели, включает в себя смену трех вариантов питательных сред: индукционную (W2,4D (жидкая)), морфогенную (WB/А (жидкая)) и безгормональную (W0 (твердая)), что более чем в 3 раза ускоряет процесс получения микрорастений и значительно сокращает трудозатраты, кроме того, обеспечивает стабильное формирование микрорастений S. glabra за счет сохранения эмбриогенности клеточных культур на всем протяжении технологического процесса. 1 з.п. ф-лы, 2 табл., 5 ил.
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АЛЛАНТОИНА // 2484093
Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения аллантоина, ценного биологически активного вещества для медицины и косметологии
