Патенты автора Липкин Алексей Валерьевич (RU)

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к рекомбинантной плазмиде, обеспечивающей биосинтез и секрецию прохимозина. Предложена рекомбинантная плазмида pSF002, обеспечивающая биосинтез и секрецию прохимозина с SEQ ID NO: 1, имеющая размер 6106 п.о. и состоящая из следующих элементов: а) AOX1 promoter - 5'-концевая область промотора алкоголь оксидазы; б) Alpha factor signal peptide - участок, кодирующий N-концевой сигнальный пептид ppMFα1D с SEQ ID NO: 12; в) последовательность гена прохимозина быка, оптимизированная для экспрессии в Pichia pastoris; г) tTEF1 transcription terminator - терминатор транскрипции; д) pUC origin - бактериальная точка начала репликации pUC; е) Amp(R) - ген Amp, обеспечивающий устойчивость к ампициллину; ж) Zeo(R) - ген BleoR устойчивости к селективному антибиотику зеоцину. Изобретение обеспечивает эффективный синтез целевого белка. 6 ил., 6 пр.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ продукции рекомбинантного химозина, предусматривающий совместную трансформацию рекомбинантной плазмиды GS115/pPICZα-Chym и рекомбинантной плазмиды GS115/pPIC9-HAC1 в штамм P. pastoris, выращивание полученного штамма и определение наличия рекомбинантного химозина в культуральной среде. При этом рекомбинантная плазмида GS115/pPICZα-Chym обеспечивает биосинтез и секрецию химозина с последовательностью SEQ ID NO: 1, имеет размер 4648 п.о. и представлена на фиг. 1. Рекомбинантная плазмида GS115/pPIC9-HAC1 обеспечивает биосинтез фактора HAC1 с последовательностью SEQ ID NO: 2, позволяющего увеличить уровень экспрессии химозина, имеет размер 9088 п.о. и представлена на фиг.2. Изобретение обеспечивает увеличение уровня продукции химозина. 2 ил., 4 пр.

Предложена плазмида pPICZaA-PLA2-K4, обеспечивающая биосинтез и секрецию гомогенной дегликозилированной рекомбинантной фосфолипазы А2 Streptomyces violaceoruber с рН оптимумом 6,5. Плазмида имеет размер 3859 п.н. Плазмида содержит модифицированную последовательность гена фосфолипазы А2 с SEQ ID NO: 1, оптимизированную для экспрессии в Pichia pastoris, с удаленными сайтами гликозилирования. Изобретение обеспечивает получение активной рекомбинантной фосфолипазы А2 Streptomyces violaceoruber, секретируемой в культуральную среду с высоким выходом. 3 ил., 5 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ получения и очистки рекомбинантной фосфолипазы А2 Streptomyces violaceoruber из штамм-продуцента Pichia pastoris. Изобретение позволяет получать рекомбинантную секреторную фосфолипазу А2 Streptomyces violaceoruber с высокой концентрацией и степенью очистки более 90%. Способ очистки фосфолипазы А2 из композиции, включающей фосфолипазу А2 и компоненты среды для культивирования клеток, включающий концентрирование культуральной жидкости на керамических фильтрах TAMI (10 кДа) с концентрированием объема культуральной жидкости в 5 раз, отличающийся тем, что способ состоит из нескольких последовательных стадий, после концентрирования производят разбавление концентрата культуральной жидкости в 10-кратном объеме буфера 20 мМ Tris-HCl рН=8.0, после чего разбавленный раствор культуральной жидкости наносят на анионообменную хроматографическую колонку с пришитыми к носителю четвертичными аминами и элюцию в 20 мМ Tris-HCl рН=8.0 в градиенте 0-1М хлорида натрия, и добавляют хлорид натрия до 2М к фракциям, не связавшимся с анионообменной хроматографической колонкой, затем на хроматографическую колонку наносят объединенные фракции с носителем для хроматографии гидрофобных взаимодействий, содержащие бутил-группы, затем объединенные фракции элюируют в 20 мМ Tris-HCl рН=8.0, в градиенте хлорида натрия от 2М до нуля, понижая содержание хлорида натрия, после чего производят сбор фракций в диапазоне 65-100% элюата, содержащих высокоактивную высокоочищенную фосфолипазу А2, которые объединяют после хроматографии гидрофобных взаимодействий. Изобретение позволяет получить высокоочищенный препарат рекомбинантной фосфолипазы А2 с высокой (более 90%) степенью очистки с выходом более 50% от начального содержания белка в культуральной жидкости. 3 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии и генной инженерии и представляет собой рекомбинантную плазмиду pHisTevTSIB0821 для экспрессии в клетках Escherichia coli пролидазы TSIB_0821 из археи Thermococcus sibiricus. Заявленная плазмида включает NdeI/SalI-фрагмент плазмиды pET-22b(+) (Novagen) и фрагмент ДНК размером 1196 пар оснований, содержащий слитый ген, состоящий из следующих структурных элементов: нуклеотидная последовательность, кодирующая шестигистидиновый таг, нуклеотидная последовательность, кодирующая сайт узнавания/расщепления протеазы TEV, и нуклеотидная последовательность гена TSIB_0821, соединенных так, чтобы при их биосинтезе в клетках Е. coli сохранялась непрерывная рамка считывания. Получен штамм Е. coli Rosetta(DE3), трансформированный указанной плазмидой, - продуцент химерного белка, включающего аминокислотную последовательность пролидазы TSIB_0821 слитую на N-конце с шестигистидиновым тагом и сайтом узнавания/расщепления протеазы TEV. Разработан способ выращивания и индукции штамма-продуцента и метод выделения и очистки из полученной биомассы функционально-активной рекомбинантной пролидазы TSIB_0821, включающий следующие технологические процессы: две металлоаффинные хроматографии, гель-фильтрацию, обработку TEV протеазой, диализ, концентрирование. Изобретение позволяет получить рекомбинантную пролидазу, максимально приближенную по структуре к ее природному аналогу с высоким и стабильным выходом, уровнем очистки и функциональной активности. 3 н.п. ф-лы, 3 пр.
Изобретение относится к способу получения композитного материала для электрода суперконденсатора, включающему синтез электропроводящих полимеров или их замещенных производных в процессе окислительной полимеризации соответствующих мономеров на поверхности углеродных материалов. Экологически приемлемый способ заключается в том, что полимеризацию проводят в присутствии растворенных в реакционной смеси фермента лакказы, кислых допантов, окислителя и редокс-медиатора ферментативной реакции. 9 з.п. ф-лы, 4 пр.

 


Наверх