Патенты автора Смирнова Мария Сергеевна (RU)
Изобретение относится к штамму Escherichia coli BL21(DE3), предназначенному для получения ω-амидазы человека. Предложен штамм Escherichia coli BL21(DE3), трансформированный экспрессионной плазмидной конструкцией pQE-Nit22, представленной на фиг. 1. При этом в составе экспрессионной плазмидной конструкции pQE-Nit22 81 нуклеотид кодирующей области гена Nit2, ограниченный сайтами рестриктаз BamHI и SphI, соответствует SEQ ID#1. Изобретение позволяет повысить выход продукта при культивировании на питательных средах на основе пептона, дрожжевого экстракта и глюкозы. 4 ил., 4 табл.
Изобретение относится к области биотехнологии. Описан способ получения прочного комплекса иона Gd3+ с искусственным рекомбинантным белком W4. Способ отличается тем, что очищенный белок W4 наносят на колонку с ионообменным сорбентом в соотношении от 1:0,5 до 1:2 мг на мл сорбента в буфере HEPES с концентрацией 10-20 мМ и рН 7,0-7,4, и нитрат гадолиния в концентрации 1 мМ наносят в буфере для уравновешивания колонки в соотношении 0,2 мл на мл сорбента, при этом соотношение в комплексе составляет 1:12,193±0,1102 моль Gd3+ на моль белка. Изобретение расширяет арсенал способов получения комплексов иона Gd3+ с рекомбинантными белками, пригодных для контрастирования опухолей с помощью спектроскопии парамагнитного резонанса, а также для радиотерапии опухолей по принципу термоаблации. 1 табл., 1 пр.
Изобретение относится к области медицинской химии и онкологии. Предложено применение полиакрилата золота (полимера полиакриловой кислоты, содержащего ионы золота (III)) в качестве цитотоксического средства для химиотерапии меланомы. Технический результат: полиакрилат золота обладает высокой специфической активностью в отношении клеток меланомы человека и мыши при существенно более низкой острой токсичности (т.е. широким терапевтическим индексом) по сравнению с Цисплатином - наиболее близким по химическому составу коммерчески применимым цитостатиком, рекомендованным для терапии меланом. Предполагается, что полиакрилат золота будет востребован для лечения меланомы и предотвращения выработки ее устойчивости к химиопрепаратам. 2 табл., 4 ил.
Изобретение относится к способу получения полиакрилата золота. Способ включает взаимодействие водных растворов полиакриловой кислоты и золотохлористоводородной кислоты. Перед введением в реакцию исходную полиакриловую кислоту подвергают проточному диализу и последующей лиофильной сушке. Водные растворы золотохлористоводородной кислоты и полиакриловой вводят в реакцию в количествах, обеспечивающих 5-10-кратный мольный избыток мономерного звена (-СH2-СНСООН-) относительно золотохлористоводородной кислоты, при этом применяют полиакриловую кислоту со средней молекулярной массой в диапазоне 1,6-140 кДа. Полученный продукт подвергают проточному диализу. Способ обеспечивает получение хорошо растворимого в воде полиакрилата золота с повышенным содержанием Au(III), отвечающего за его цитотоксическую активность. 3 з.п. ф-лы, 1 ил., 1 табл., 10 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии и касается рекомбинантного штамма E. coli, являющегося продуцентом антигена возбудителя сибирской язвы Bacillus anthracis. Представленный штамм получен на основе протективного антигена Bacillus anthracis путем введения в штамм E. coli BL21 (DE3) плазмиды pTrPPA. Плазмида pTrPPA содержит в своем составе промотор фага Т7, который контролирует экспрессию слитого гена, представляющего собой продукт гена 142 Т5-подобного фага DT57C, известного как белок, терминирующий хвост (TrP), слитый через 3’-конец с доменом 1 протективного антигена B. anthracis, что позволяет при протеолитическом отщеплении в процессе транспорта токсина в цитоплазму клетки-мишени сохранять структурную стабильность антигена, и экспрессирующегося в форме вирусоподобных частиц. Изобретение обеспечивает выход целевого продукта не ниже 1 г/л культуры в оптимальных условиях культивирования, а также позволяет получать изолированный домен 1 основного защитного антигена возбудителя сибирской язвы B. anthracis в форме вирусоподобных частиц, что облегчает его очистку и потенциально повышает иммуногенность. 6 ил.
Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к получению рекомбинантного ферментативно-меченного антигена G2 хантавируса Добрава. Сущность изобретения состоит в том, что предлагаемый способ получения антигена G2 хантавируса Добрава заключается в экспрессии антигена в клетках E.coli в виде ферментативно-меченного антигена G2 хантавирусов на основе белка-антигена НТ. Ферментативной меткой для белка-антигена служит бета-галактозидаза, являющаяся высокоактивным стабильным ферментом. Наличие коммерчески доступного хромогенного субстрата бета-галактозидазы (X-gal) дает возможность быстро оценивать результат иммунологической реакции визуально или по изменению оптической плотности раствора в видимой области. Изобретение может быть использовано для повышения специфичности и воспроизводимости иммуноферментного анализа при диагностике ГЛПС. 6 ил.
МЕТОД ПОЛУЧЕНИЯ БИБЛИОТЕК СЕРИЙНЫХ ДВУХСТОРОННИХ ДЕЛЕЦИЙ С ПОМОЩЬЮ ПЦР С ВЫРОЖДЕННЫМ ПРАЙМЕРОМ // 2511424
Настоящее изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ конструирования библиотек делеционных производных генов на основе ПЦР со случайной затравкой. В исследуемый ген, в форме линейной ДНК вносятся однонитевые разрывы путем обработки панкреатической ДНКазой I в серии разведений. Разрывы расширяют обработкой полимеразой I из Е.coli в отсутствие нуклеотидтрифосфатов. Затем присоединяют к матрице случайную затравку, которая имеет на 3'-конце 6-, 11- или 17-членную случайную последовательность, а на 5'-конце - константный участок (20 нуклеотидов), предназначенный для отжига адаптерного праймера. Далее осуществляют препаративную наработку библиотеки методом ПЦР с симметричным адаптерным праймером, который присоединяют к подготовленной матрице путем обработки T4 ДНК-лигазой, что позволяет эффективно удалять димеры праймеров, образовавшиеся за счет взаимного отжига случайных последовательностей. Полученные in vitro банки делеционых производных в дальнейшем могут быть подвергнуты скринингу с целью отбора вариантов, для дальнейшей их экспрессии in vivo. Способ позволяет получать укороченные варианты практически важных генов с улучшенными биотехнологическими характеристиками. Способ может быть использован для получения библиотек делеционных производных генов для последующего их использования в области биотехнологии, сельского хозяйства и пищевой, фармацевтической, медицине промышленности. 12 ил., 1 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа выявления O-гликозилированных белков в составе клеточных гомогенатов, подготавливаемых к протеомному и фосфопротеомному анализу. Предложенное изобретение может быть использовано для проведения протеомного и фосфопротеомного анализа. Способ включает проведение двумерного электрофореза с последующей идентификацией пятен методами спектроскопии MALDI-TOF или фосфопротеомики. Проводят обессоливание клеточных гомогенатов методом гель-хроматографии или диализа клеточных гомогенатов. Подвергают клеточные гомогенаты дегликозилированию по принципу β-элиминирования в растворе 0,05 М NaOH, который содержит 38 мг/мл NaBH4, в течение 16 часов при +45°C с последующим добавлением цианинового красителя JC-1 в концентрации 10-6 М. Инкубируют клеточные гомогенаты в течение 15 мин при комнатной температуре. Концентрируют гомогенаты осаждением 50% ацетоном, подвергают двумерному электрофорезу с образованием электрофореграмм, анализируемых на флуоресценцию при облучении на трансиллюминаторе синего цвета со светофильтром янтарного цвета, визуально проявляющуюся в виде светящихся в темноте полос. Данные полосы экстрагируют из геля и используют для проведения протеомного или фосфопротеомного анализа. Дополнительный анализ интенсивности и расположения экстрагируемых полос выполняют за счет сравнения окрашенных азотнокислым серебром электрофореграмм гомогенатов до и после процедуры дегликозилирования. Предложенное изобретение позволяет идентифицировать белки, меняющие состав или степень своего O-гликозилирования в результате какого-либо физиологического воздействия на клетку. 5 ил.
Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа получения рекомбинантного антигена G2 хантавирусов. Представленный способ характеризуется тем, что ДНК конструкции pGHF, кодирующая слитый белок из трех частей, где N-концевое положение занимает зеленый флуоресцентный белок GFP, центральное - пептид длиной 73 а.о. с последовательностью аминокислот SRKKCNFATTPICEYDGNMVSGYKKVMATIDSFQAFNTSYIHYTDEQIEWKDPDGMLKDHLNILVTKDIDFDT, а C-концевое - мини-домен фолдон фибритина колифага JS98C3 (фиг.2), вводят в клетки E.coli, культивируют трансформированные данной конструкцией клетки, лизируют биомассу, отделяют нерастворимую фракцию лизата центрифугированием, продукт экспрессии в форме телец включения солюбилизируют с помощью денатурата, проводят хроматографию и используют полученный продукт для выявления специфических антител в сыворотке больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом. Представленное решение позволяет улучшить воспроизводимость и чувствительность иммуноферментного анализа при диагностике ГЛПС. 7 ил.
Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу получения рекомбинантного антигена G2 хантавируса Добрава в клетках Е.coli. Способ характеризуется тем, что ДНК конструкции рНК6, указанной на фиг.1, кодирующая слитой белок из трех частей, где N-концевое положение занимает зеленый флуоресцентный белок GFP, центральное - пептид длиной 73 а.о. с последовательностью аминокислот SRKKCNFATTPICEYDGNMVSGYKKVMATIDSFQAFNTSYIHYTDEQIEW KDPDGMLKDHLNILVTKDIDFDT, а С-концевое - легкая цепь двуцепочечного белкового ингибитора типа Кунитца из клубней картофеля (PKPI-BI), вводят в клетки Е.coli. Культивируют трансформированные данной конструкцией клетки, лизируют биомассу, отделяют нерастворимую фракцию лизата центрифугированием. Продукт экспрессии в форме телец включения солюбилизируют с помощью денатуранта. Проводят хроматографию в денатурирующих условиях. Используют полученный продукт для выявления специфических антител в сыворотке больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом. Предложенное изобретение позволяет получать рекомбинантный антиген G2 хантавируса Добрава в клетках Е.coli с увеличенным выходом. 6 ил., 1 пр.
