Патенты автора Баловнева Мария Владимировна (RU)
Способ репликации человеческого митохондриального генома в клетках дрожжей Yarrowia lipolytica // 2660715
Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ репликации человеческого митохондриального генома в клетках дрожжей Yarrowia lipolytica. Используя метод химической трансформации, осуществляют трансформацию препарата суммарной ДНК человека в штамм Yarrowia lipolytica, содержащий ранее интегрированные конструкции pQ-SRUS и Lys39H (SEQ ID NO 1) на основе маркера устойчивости к гигромицину HygR (SEQ ID NO 3), либо штамм Yarrowia lipolytica, содержащий ранее интегрированные конструкции pQ-SRUS и Leu36H (SEQ ID NO 2). Проводят отбор трансформантов на минимальной синтетической среде, содержащей сукцинат в качестве единственного источника энергии. Определяют наличие реплицирующейся ДНК митохондриального генома человека с помощью ПЦР в реальном времени с парами праймеров, специфичных к ДНК митохондриального генома человека: MTTL1 (gggtttgttAagatggcagagcccggt)/MTTL2 (ggttggccatgggtatgttgttaagaa) для выявления последовательности гена тРНК - Leu генома человека и TRNK1 (agaaccaacacctctttacagtgaaat)/ TRNK2 (ttagttgggtgatgaggaatagtgtaa) для выявления последовательности гена тPHK-Lys генома человека. Изобретение может быть использовано для коррекции вредных мутаций митохондриального генома человека и препаративной наработки, скорректированной по последовательности интактной митохондриальной ДНК в клетках дрожжей с целью ее последующего введения в мезенхимальные стромальные клетки пациента в интересах лечения распространенных митохондриальных болезней человека, нарушающих функциональность генов митохондриальных Lys-Leu-специфичных рРНК. 6 ил., 1 табл.
Настоящее изобретение относится к биохимии, в частности к способу модификации гена LacZ из Escherichia coli. Для осуществления способа фрагмент ДНК, содержащий кодирующую область гена LacZ, нарабатывают с помощью полимеразной цепной реакции с использованием олигонуклеотидного праймера, позволяющего ввести дополнительный кодон GGA, кодирующий глицин, непосредственно после инициаторного кодона ATG. Настоящий способ позволяет адаптировать указанный ген для его экспрессии в клетках Yarrowia lipolytica. 2 ил., 2 табл.
Изобретение относится к области биотехнологии. Описан способ получения иммуноферментной тест-системы для оценки содержания иммуноспецифических белков хантавирусов Пуумала, Добрава, Хантаан и Сеул в вакцинных препаратах против геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС). Способ предусматривает получение моноклональных антител к вирусам Пуумала и Добрава с одинаковой чувствительностью, в соответствии с титром вируса, выявляющих антигены каждого из 4-х хантавирусов - возбудителей ГЛПС, и их последующую сорбцию на поверхность полистироловой панели. 3 табл., 2 пр.
Предлагаемое изобретение относится к области биотехнологии и касается способа получения иммуноферментной тест-системы для определения эпитопов оболочечного белка вируса Пуумала протективной направленности в вакцинных препаратах против геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС). Охарактеризованный способ включает получение мышиных моноклональных антител, обладающих нейтрализующей активностью по отношению к вирусу Пуумала. Сорбцию таких антител на поверхность иммунопанели. Выделение IgG из сывороток крови реконвалесцентов ГЛПС с высокими титрами специфических антител к вирусу Пуумала. Приготовление конъюгата специфических IgG с пероксидазой хрена. Представленное изобретение позволяет с одинаковой чувствительностью выявлять оболочечный белок как живого, так и инактивированного вируса Пуумала, посредством чего контролировать содержание в вакцинном препарате указанного вируса, являющегося возбудителем геморрагической лихорадки с почечным синдромом. 2 табл., 1 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу получения рекомбинантного антигена G2 хантавируса Добрава в клетках Е.coli. Способ характеризуется тем, что ДНК конструкции рНК6, указанной на фиг.1, кодирующая слитой белок из трех частей, где N-концевое положение занимает зеленый флуоресцентный белок GFP, центральное - пептид длиной 73 а.о. с последовательностью аминокислот SRKKCNFATTPICEYDGNMVSGYKKVMATIDSFQAFNTSYIHYTDEQIEW KDPDGMLKDHLNILVTKDIDFDT, а С-концевое - легкая цепь двуцепочечного белкового ингибитора типа Кунитца из клубней картофеля (PKPI-BI), вводят в клетки Е.coli. Культивируют трансформированные данной конструкцией клетки, лизируют биомассу, отделяют нерастворимую фракцию лизата центрифугированием. Продукт экспрессии в форме телец включения солюбилизируют с помощью денатуранта. Проводят хроматографию в денатурирующих условиях. Используют полученный продукт для выявления специфических антител в сыворотке больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом. Предложенное изобретение позволяет получать рекомбинантный антиген G2 хантавируса Добрава в клетках Е.coli с увеличенным выходом. 6 ил., 1 пр.
