Патенты автора Казеева Тамара Николаевна (RU)
Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к получению рекомбинантного ферментативно-меченного антигена G2 хантавируса Добрава. Сущность изобретения состоит в том, что предлагаемый способ получения антигена G2 хантавируса Добрава заключается в экспрессии антигена в клетках E.coli в виде ферментативно-меченного антигена G2 хантавирусов на основе белка-антигена НТ. Ферментативной меткой для белка-антигена служит бета-галактозидаза, являющаяся высокоактивным стабильным ферментом. Наличие коммерчески доступного хромогенного субстрата бета-галактозидазы (X-gal) дает возможность быстро оценивать результат иммунологической реакции визуально или по изменению оптической плотности раствора в видимой области. Изобретение может быть использовано для повышения специфичности и воспроизводимости иммуноферментного анализа при диагностике ГЛПС. 6 ил.
Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа выявления O-гликозилированных белков в составе клеточных гомогенатов, подготавливаемых к протеомному и фосфопротеомному анализу. Предложенное изобретение может быть использовано для проведения протеомного и фосфопротеомного анализа. Способ включает проведение двумерного электрофореза с последующей идентификацией пятен методами спектроскопии MALDI-TOF или фосфопротеомики. Проводят обессоливание клеточных гомогенатов методом гель-хроматографии или диализа клеточных гомогенатов. Подвергают клеточные гомогенаты дегликозилированию по принципу β-элиминирования в растворе 0,05 М NaOH, который содержит 38 мг/мл NaBH4, в течение 16 часов при +45°C с последующим добавлением цианинового красителя JC-1 в концентрации 10-6 М. Инкубируют клеточные гомогенаты в течение 15 мин при комнатной температуре. Концентрируют гомогенаты осаждением 50% ацетоном, подвергают двумерному электрофорезу с образованием электрофореграмм, анализируемых на флуоресценцию при облучении на трансиллюминаторе синего цвета со светофильтром янтарного цвета, визуально проявляющуюся в виде светящихся в темноте полос. Данные полосы экстрагируют из геля и используют для проведения протеомного или фосфопротеомного анализа. Дополнительный анализ интенсивности и расположения экстрагируемых полос выполняют за счет сравнения окрашенных азотнокислым серебром электрофореграмм гомогенатов до и после процедуры дегликозилирования. Предложенное изобретение позволяет идентифицировать белки, меняющие состав или степень своего O-гликозилирования в результате какого-либо физиологического воздействия на клетку. 5 ил.
Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа получения рекомбинантного антигена G2 хантавирусов. Представленный способ характеризуется тем, что ДНК конструкции pGHF, кодирующая слитый белок из трех частей, где N-концевое положение занимает зеленый флуоресцентный белок GFP, центральное - пептид длиной 73 а.о. с последовательностью аминокислот SRKKCNFATTPICEYDGNMVSGYKKVMATIDSFQAFNTSYIHYTDEQIEWKDPDGMLKDHLNILVTKDIDFDT, а C-концевое - мини-домен фолдон фибритина колифага JS98C3 (фиг.2), вводят в клетки E.coli, культивируют трансформированные данной конструкцией клетки, лизируют биомассу, отделяют нерастворимую фракцию лизата центрифугированием, продукт экспрессии в форме телец включения солюбилизируют с помощью денатурата, проводят хроматографию и используют полученный продукт для выявления специфических антител в сыворотке больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом. Представленное решение позволяет улучшить воспроизводимость и чувствительность иммуноферментного анализа при диагностике ГЛПС. 7 ил.
Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу получения рекомбинантного антигена G2 хантавируса Добрава в клетках Е.coli. Способ характеризуется тем, что ДНК конструкции рНК6, указанной на фиг.1, кодирующая слитой белок из трех частей, где N-концевое положение занимает зеленый флуоресцентный белок GFP, центральное - пептид длиной 73 а.о. с последовательностью аминокислот SRKKCNFATTPICEYDGNMVSGYKKVMATIDSFQAFNTSYIHYTDEQIEW KDPDGMLKDHLNILVTKDIDFDT, а С-концевое - легкая цепь двуцепочечного белкового ингибитора типа Кунитца из клубней картофеля (PKPI-BI), вводят в клетки Е.coli. Культивируют трансформированные данной конструкцией клетки, лизируют биомассу, отделяют нерастворимую фракцию лизата центрифугированием. Продукт экспрессии в форме телец включения солюбилизируют с помощью денатуранта. Проводят хроматографию в денатурирующих условиях. Используют полученный продукт для выявления специфических антител в сыворотке больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом. Предложенное изобретение позволяет получать рекомбинантный антиген G2 хантавируса Добрава в клетках Е.coli с увеличенным выходом. 6 ил., 1 пр.
