Патенты автора Кривохарченко Александр Сергеевич (RU)
Изобретение касается способа капацитации криоконсервированных сперматозоидов КРС для in vitro оплодотворения яйцеклеток в полностью химически «определенной» системе. Способ заключается в том, что в безбелковую среду оплодотворения Тироде вместо 10 мкг/мл гепарина вводят в качестве капацитирующего агента дбцАМФ в концентрации 100 мкМ. При этом среда оплодотворения не содержит глюкозы, а также каких-либо добавок, активирующих сперматозоиды. Изобретение обеспечивает повышение эффективности получения эмбрионов КРС in vitro и может быть использовано для исследовательских целей. 2 табл., 1 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способам слияния эмбриональных клеток. Описан способ получения химерной бластоцисты. Первоначально действием ультракороткого лазерного импульса выполняют слияние двух бластомеров эмбриона путем облучения участка естественного контакта, затем несколькими импульсами диодного лазера выполняют прокол размером 10-12 мкм блестящей оболочки эмбриона в области максимально удаленной от бластомеров, посредством действия ИК-лазера, в полученный прокол действием ИК-лазера помещают предварительно модифицированные эмбриональные стволовые клетки. Технический результат, получаемый при реализации разработанного способа за счет одновременного использования трех лазеров, обеспечивает возможность быстрого и технологичного введения стволовых клеток с модифицированным геномом в эмбрион мыши на различных стадиях развития и с разной плоидностью бластомеров в один этап, что обеспечивает получение сразу чистых линий с более высокой эффективностью, без потери времени и затрат на последующее скрещивание химер для выведения чистых линий. Изобретение может быть использовано для повышения эффективности реконструирования эмбрионов. 4 з.п. ф-лы.
Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способам слияния эмбриональных клеток, конкретно к лазерному слиянию бластомеров внутри ранних доимплантационных эмбрионов млекопитающих без нарушения их целостности. Предложен способ лазерного слияния бластомеров внутри 4-клеточного мышиного эмбриона без нарушения его целостности, включающий выведение эмбриона на экран монитора и облучение лазерными импульсами визуально выбранной точки на линии плотного контакта бластомеров внутри эмбриона. Слиянию подвергают либо два бластомера внутри 4-клеточного эмбриона с образованием эмбриона из трех клеток, одна из которых тетраплоидная, либо последовательно две пары бластомеров с образованием эмбриона из двух тетраплоидных клеток, либо последовательно три бластомера с образованием эмбриона из двух клеток разного размера: гексаплоидной и интактной диплоидной. Облучение осуществляют последовательностью фемтосекундных лазерных импульсов с длиной волны 800 нм при частоте повторения 80 МГц мощностью 0,06-0,12 Вт и длительностью последовательности 10-30 мс. Для нахождения области наиболее плотного контакта бластомеров внутри эмбриона используют лазерный пинцет, позволяющий перемещать и поворачивать эмбрион на экране монитора. Способ позволяет воздействием фемтосекундного лазерного облучения проводить успешное слияние бластомеров внутри 4-клеточного мышиного эмбриона без нарушения его целостности с получением различных по структуре эмбрионов, содержащих клетки различной плоидности. Изобретение может быть использовано для повышения эффективности реконструирования эмбрионов. 1 з.п. ф-лы, 6 ил.
