Патенты автора Красицкая Василиса Валерьевна (RU)
Изобретение относится к области биотехнологии и медицины, а именно к области ДНК аптамеров, способных специфично и с высоким сродством связываться с сердечным тропонином I человека. Основными областями применения ДНК-аптамеров к сердечному тропонину I являются клинические исследования, медицинская диагностика инфаркта миокарда, в том числе создание высокочувствительных и высокоэффективных систем для детекции сердечного тропонина I. ДНК аптамеры, связывающие сердечный тропонин I человека, представлены одноцепочечными ДНК. ДНК аптамер ТnАр2 имеет первичную последовательность 5'-GGCAGCAGGAAGACAAGACAGGCAGTGT CACGCGCTCAAGGGTGGAGGGGTCGGGG AGGTTGGTTCTGTGGTTGCTCTGT-3', отобран в результате позитивной селекции против нативного сердечного тропонина I человека и негативной селекции против человеческих сывороточного альбумина, сердечных тропонинов С и Т, миоглобина и креатинкиназы MB; ДНК аптамер TnAp2t1 имеет первичную последовательность 5'-AGACAAGACAGGCAGTGTCA CGCGCTCAAGGGTGGAGG GGTCGGGGAGGTTGGT-3', отобран в результате позитивной селекции против нативного сердечного тропонина I человека и негативной селекции против человеческих сывороточного альбумина, сердечных тропонинов С и Т, миоглобина и креатинкиназы MB и оптимизации последовательности аптамера ТnАр2; ДНК аптамер TnAp2t2 имеет первичную последовательность 5'-GGCAGTGTCACGCGCTCAAGG GTGGAGGGGTCGGGGAGGT-3', отобран в результате позитивной селекции против нативного сердечного тропонина I человека и негативной селекции против человеческих сывороточного альбумина, сердечных тропонинов С и Т, миоглобина и креатинкиназы MB и оптимизации последовательности аптамера ТnАр2; ДНК аптамер TnAp2t3 имеет первичную последовательность 5'-GCTCAAGGGTGGAGGGGTCGGGGAGGT-3', отобран в результате позитивной селекции против нативного сердечного тропонина I человека и негативной селекции против человеческих сывороточного альбумина, сердечных тропонинов С и Т, миоглобина и креатинкиназы MB и оптимизации последовательности аптамера ТnАр2; ДНК аптамер ТnАр12 имеет первичную последовательность 5'-GGCAGCAGGAAGACAAGACATCGGGAGGGAG GGAGGGCAGTCTAGTCTCATGTG TTTCCATGGTTCTGTGGTTGCTCTGT-3', отобран в результате позитивной селекции против нативного сердечного тропонина I человека и негативной селекции против человеческих сывороточного альбумина, сердечных тропонинов С и Т, миоглобина и креатинкиназы MB. Полученные ДНК аптамеры обладают способностью специфично и высокоафинно связываться с человеческим сердечным тропонином I, а также расширяется их ассортимент. 4 ил.
Изобретение относится к области биотехнологии и медицины. Описан способ выявления в крови больных циркулирующих мишеней, ассоциированных с определенным диагнозом. Обрабатывают твердую фазу биоспецифическими реагентами, отделяют непрореагировавшую жидкую фазу, инкубируют с мишенью, ассоциированной с определенным диагнозом. Далее обрабатывают твердую фазу репортером, разделяют жидкую и твердую фазы. Проводят анализ твердой фазы. В качестве твердой фазы используют магнитные микрочастицы с ковалентно иммобилизованными молекулами стрептавидина, в качестве биоспецифического реагента для первой обработки твердой фазы используют ДНК-аптамер, связывающийся с поверхностью за счет гибридизации с меченным биотином олигонуклеотидом 5'-CGTGGTTACAGTCAGAGGAG-3'-Вio, комплементарным константному концевому участку ДНК-аптамера, а в качестве репортера - другой ДНК-аптамер, меченный конъюгатом того же олигонуклеотида с Са2+-регулируемым фотопротеином обелином. Техническим результатом изобретения является разработка более чувствительного, универсального, экспрессного и технологичного биолюминесцентного способа выявления мишеней, ассоциированных с определенным диагнозом, в крови пациентов. 3 ил., 2 пр.
СПОСОБ ОДНОВРЕМЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДВУХ АНАЛИТОВ БИОЛЮМИНЕСЦЕНТНЫМ МОЛЕКУЛЯРНЫМ МИКРОАНАЛИЗОМ // 2497128
Способ одновременного определения двух аналитов биолюминесцентным молекулярным микроанализом относится к биохимии, а именно к способам проведения иммуноферментного и ДНК гибридизационного анализа. Способ одновременного определения двух аналитов биолюминесцентным молекулярным микроанализом включает обработку твердой фазы биоспецифическим реагентом, отделение непрореагировавшей жидкой фазы, обработку твердой фазы ферментосодержащим конъюгатом, разделение жидкой и твердой фаз и анализ твердой фазы, в котором в качестве биоспецифического реагента для первой обработки твердой фазы используют два иммуноглобулина или один иммуноглобулин с двойной специфичностью или два олигонуклеотида, а конечную обработку твердой фазы проводят одновременно двумя ферментсодержащими конъюгатами, состоящими, соответственно, из рекомбинантных Cа2+ зависимых фотопротеинов обелинов с разными характеристиками биолюминесценции и молекул разной биоспецифичностью, где в качестве рекомбинантных обелинов используют обелин W92F; H22E и обелин Y138F, с последующим анализом на планшетном биолюминометре с быстро перемещающимися широкополостными светофильтрами с разделением сигналов и по спектру и по времени. 4 ил., 3 пр.
