Патенты автора Завальный Михаил Александрович (RU)
Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для получения рекомбинантного фактора свертываемости крови VIII человека с делецией В-домена (hFVIII-BDD). Рекомбинантной плазмидной ДНК ДНК рАР227, кодирующей полипептид с последовательностью hFVIII-BDD, включающей также MAR - область прикрепления к ядерному матриксу гена лизоцима птиц, усилитель транскрипции вируса CMV, внутренний сайт инициации трансляции IRES вируса энцефаломиокардита, ген DHFR мыши, сигнал полиаденилирования вируса SV40, ген аминогликозид-3'-фосфотрансферазы, обеспечивающей устойчивость к генетицину (Neo), кассету для экспрессии в клетках бактерий гена β-лактамазы, обеспечивающей устойчивость к ампицилину, трансформируют клетки линии Cricetulus griseus CHO DHFR (-) с получением линии клеток Cricetulus griseus CHO 2H5, продуцирующей рекомбинантный hFVIII-BDD со стабильно высоким выходом на уровне около 20 МЕ/мл/24 ч. Культивирование клеток-продуцентов проводят в среде DME/F12, содержащей 2-4% фетальной бычьей сыворотки, 1% диметилсульфоксида и 50 МЕ/л инсулина. 3 н. и 1 з.п. ф-лы, 5 ил., 9 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для получения тканевого активатора плазминогена человека. Рекомбинантной плазмидной ДНК рВК415, кодирующей полипептид с последовательностью тканевого активатора плазминогена человека, включающей также MAR - область прикрепления к ядерному матриксу гена лизоцима птиц, усилитель транскрипции вируса CMV, внутренний сайт инициации трансляции IRES вируса энцефаломиокардита, ген DHFR мыши, сигнал полиаденилирования вируса SV40, ген аминогликозид-3'-фосфотрансферазы, обеспечивающей устойчивость к генетицину (Neo) и кассету для экспрессии в клетках бактерий гена β-лактамазы, обеспечивающей устойчивость к ампицилину, трансформируют клетки линии Cricetulus griseus CHO DHFR(-) с получением линии клеток Cricetulus griseus CHO 1F8, продуцирующей рекомбинантный белок тканевого активатора плазминогена со стабильно высоким выходом на уровне до 190 мг/л. Культивирование клеток-продуцентов проводят в перфузионных условиях в присутствии смеси, состоящей из добавки CHO Bioreactor supplement и бутирата натрия или диметилсульфоксида, с последующим выделением целевого продукта. 3 н. и 2 з.п. ф-лы, 5 ил., 3 табл., 8 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для получения рекомбинантного фактора свертываемости крови IX человека (hFIX). Рекомбинантная плазмидная ДНК рАК380, содержащая ген белка rhFIX, MAR - область прикрепления к ядерному матриксу гена лизоцима птиц, усилитель транскрипции вируса CMV, внутренний сайт инициации трансляции IRES вируса энцефаломиокардита, ген DHFR мыши, сигнал полиаденилирования вируса SV40, ген аминогликозид-3'-фосфотрансферазы для устойчивости к генетицину (Neo), кассету для экспрессии в клетках бактерий гена β-лактамазы для устойчивости к ампицилину, используется для получения рекомбинантного фактора hFIX в клетках линии Cricetulus griseus CHO 1E6. Путем трансформации линии клеток С.griseus CHO DHFR - рекомбинантной плазмидной ДНК рАК380 получают линию клеток С.griseus CHO 1E6, продуцирующую рекомбинантный hFIX со стабильно высоким выходом на уровне 50 мг/л/24 ч. После культивирования клеток-продуцентов выделяют hFIX путем псевдоаффинной хроматографии на Q-Сефарозе с элюцией 10 мМ CaCl2, затем на Heparin-Сефарозе FF с элюцией 600 мМ NaCl и хроматографии на гидроксиапатите типа I с элюцией 600 мМ К3РО3 и хроматографии на Source 30Q с элюцией 600 мМ ацетатом аммония. 3 н. и 1 з.п. ф-лы, 5 ил., 7 пр., 3 табл.
