Патенты автора Кондратов Илья Геннадьевич (RU)
Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу получения терапевтического агента для лечения клещевого энцефалита людей. Способ включает получение аптамеров, которые способны образовывать комплекс с третичной структурой поверхностного белка вируса. Используют фрагмент поверхностного белка Е вируса клещевого энцефалита, с 50 по 250 аминокислоту от N-конца белка, ген которого амплифицируют и клонируют в плазмидном векторе. Клонированный рекомбинантный белок экспрессируют. Полученный белок очищают и иммобилизуют на планшете. Из первоначального пула вырожденных олигонуклеотидов состава 5'-CTCCTCTGACTGTAACCACG-(N40)-GGCTTCTGGCTACCTATGC-3', где N - любой из нуклеотидов (G, A, T, C), взятых в эквивалентном количестве при синтезе 40-звенных олигонуклеотидов, содержащих на 5'- конце флуоресцентный краситель FAM с помощью 15 циклов экспоненциального обогащения, SELEX, проводят отбор специфично связывающихся с вирусным белком аптамеров. На каждом этапе сорбции проводят денатурацию 25 рМ одноцепочечного олигонуклеотида. Наносят денатурированный пул аптамеров в лунку с иммобилизованным белком, инкубируют и отмывают от несвязавшихся олигонуклеотидов. Связанные с белком аптамеры снимают с поверхности буфером с низкой ионной силой и высоким pH. Пул аптамеров, после каждого этапа сорбции, амплифицируют. Полученные ампликоны двуцепочечной библиотеки аптамеров очищают и проводят реакцию ассиметричной полимеразной цепной реакции (ПЦР). Продукт очищают с помощью сорбции с получением целевого продукта в виде аптамеров. Предложенное изобретение позволяет получить аптамеры, которые используют для предотвращения заболевания клещевым энцефалитом. 4 з.п. ф-лы, 1 пр.
