Патенты автора Бакунина Ирина Юрьевна (RU)
Изобретение относится к области биохимии и представляет собой плазмиду 40NaGal, определяющую синтез α-N-ацетилгалактозаминидазы α-AlNaGal, включающую NcoI/SalI-фрагмент плазмиды pET-40b(+) (Novagen) и фрагмент ДНК размером 1299 пар оснований, содержащий химерный ген, состоящий из структурной части гена α-AlNaGal, адаптированной по N-концу для экспрессии в клетках E.coli, и нуклеотиды, кодирующие специфическую последовательность для протеазы TEV. Изобретение относится также к штамму E.coli Rosetta(DE3), трансформированному указанной плазмидой, - продуценту химерного белка, включающего аминокислотную последовательность рекомбинантной α-N-ацетилгалактозаминидазы α-AlNaGal. Предложен также способ получения рекомбинантной α-N-ацетилгалактозаминидазы α-AlNaGal с использованием штамма согласно изобретению. Изобретение позволяет получать α-N-ацетилгалактозаминидазу с высокой степенью эффективности. 3 н.п. ф-лы, 1 ил., 3 пр.
Изобретение относится к области биохимии и представляет собой плазмиду, определяющую синтез α-галактозидазы α-PsGal, включающую NcoI/SalI - фрагмент плазмиды pET-40b(+) (Novagen) и фрагмент ДНК, размером 2142 пар оснований, содержащий химерный ген, состоящий из структурной части гена α-PsGal, адаптированной по N-концу для экспрессии в клетках E. coli, и нуклеотид, кодирующий специфическую последовательность для энтеропептидазы. Изобретение относится также к штамму E. coli Rosetta (DE3), трансформированному указанной плазмидой, - продуценту химерного белка, содержащего аминокислотную последовательность рекомбинантной α-галактозидазы α-PsGal и последовательность, специфичную для энтеропептидазы. Предложен также способ получения рекомбинантной α-галактозидазы α-PsGal, включающий стадии: инкубирования указанного штамма-продуцента в жидкой питательной среде LB в течение 12 ч при 16°С, осаждения бактериальных клеток центрифугированием, дезинтеграции суспензии клеток в буфере, центрифугирования экстракта, хроматографии надосадочной жидкости на колонке с металлоафинной смолой, элюции белка, концентрирования активных фракций с помощью ионообменной смолы, инкубирования с энтеропептидазой и выделения целевого продукта гель-фильтрацией. Изобретение позволяет получать более активную и стабильную рекомбинантную альфа-галактозидазу с высокой степенью эффективности. 3 н.п. ф-лы, 1 ил., 3 пр.
