Патенты автора Люкшина Елена Юрьевна (RU)
Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для получения диагностикума для определения концентрации лечебного рекомбинантного α-интерферона в сыворотке крови больных вирусными инфекциями. Для этого получают экспериментальные гипериммунные кроличьи сыворотки путем иммунизации кроликов весом от 2,5 до 3 кг с помощью введения препарата «Альтевир» в дозе 100 мкг по белку в паховый лимфатический узел в количестве 3-х инъекций с интервалом в 14 дней, затем через 14 дней после последней инъекции из крови готовят сыворотки с последующим определением титра антител; выделяют иммуноглобулины из кроличьих сывороток, для этого полученную сыворотку в количестве 4 мл соединяют с 2 мл забуференного физиологического раствора, помещают в центрифужные стаканы, ставят на лед и выливают в них сыворотку при температуре 0°С, затем добавляют забуференный физиологический раствор, перемешивают, вливают метанольную воду, при этом понижая температуру до -5°С, после стакан со смесью ставят в холодильник на 30-40 мин, а затем центрифугируют при 2000 об/мин в течение 20 мин при нулевой температуре, полученную надосадочную жидкость сливают, а осадок суспендируют в от исходного объема сыворотки, определяют количество белка по методу Лоури, получая в результате сенситин; готовят полимерный носитель, используя метод анионной полимеризации мономера - акрилового альдегида в водно-щелочной среде с получением монодисперсных частиц сферической формы диаметром 1,2±0,1 мкм, которые окрашивают сафранином, после этого носитель отмывают дистиллированной водой при 100°С и обрабатывают танином; проводят иммобилизацию сенситина на носитель, для этого суспензию микросфер в количестве 100 мг помещают в центрифужный стакан, суспензируют в 5 мл забуферного физиологического раствора и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 мин при температуре 20°С, отмытый носитель суспендируют в 2 мл забуференного физиологического раствора и при постоянном перемешивании соединяют с сенситином в количестве 1,2 мг белка, оставляют для контакта в течение 2-х ч при комнатной температуре, при этом дальнейшую иммобилизацию осуществляют при температуре 4-5°С в течение 16-18 ч; блокируют свободные альдегидные группы путем добавления к суспензии носителя с сенситином 2 мл 0,5% раствора желатозы в забуференном физиологическом растворе при рН 7,1, оставляют на 2 ч при помешивании на электромешалке при комнатной температуре; трижды отмывают полученный диагностикум забуференным физиологическим раствором при рН 7,1, предварительно центрифугируя при 3000 об/мин в течение 10 мин, конечный осадок суспендируют в 8 мл 0,1% раствора желатозы на забуференном физиологическом растворе при рН 7,1; определяют чувствительность препарата, для этого в лунки планшета вносят 50 мкл нормальной кроличьей сыворотки, затем в первую лунку первого ряда вносят 50 мкл «Альтевира» с содержанием белка 60 мкл/мл и двукратно титруют до 22-й лунки включительно, причем из последней 22-й лунки удаляют 50 мкл жидкости, 23-я и 24-я лунки служат контролем на спонтанную агглютинацию диагностикума, при этом во все лунки двух рядов вносят по 25 мкл взвеси диагностикума, через 2,5 ч инкубации при комнатной температуре проводят учет результатов реакции визуально, при этом последняя лунка, а именно 19-я, дающая положительный результат - розовый агломерат, разведение которой равно 23,5 пг белка/мл, что соответствует чувствительности диагностического препарата, а активность и специфичность жидкого антигенного препарата проверяют в реакции агломерации объемной (РАО); лиофилизацию диагностикума осуществляют путем суспендирования препарата в 20 мл 3% желатозно-сахарозной среды, затем суспензию разливают в ампулы по 1 мл с последующим высушиванием при комнатной температуре в течение суток. Использование данного диагностикума позволяет определить концентрацию лечебного рекомбинантного α-интерферона в сыворотке крови больных вирусными инфекциями, что дает возможность оценить эффективность лечения. 2 з.п. ф-лы, 7 пр.
Изобретение относится к медицинской микробиологии. Питательная среда для выделения Legionella pneumophila содержит автолизат селезенки КРС, агар микробиологический, уголь активированный, калия фосфат однозамещенный, калия фосфат двузамещенный, мезоинозит, L-цистеин, соль Мора, полимиксин, ванкомицин, амфотерицин и дистиллированную воду в заданном соотношении компонентов. Изобретение позволяет повысить чувствительность питательной среды к Legionella pneumophila. 3 табл., 6 пр.
Изобретение относится к медицинской микробиологии, а именно к получению плотной питательной среды, с помощью которой возможно определение антибиотикочувствительности культур возбудителя легионелеза - Legionella pneumophila. Питательная среда содержит ферментоаутолизат селезенки крупного рогатого скота, калия фосфат однозамещенный, калия фосфат двузамещенный, глюконат калия, мезоинозит, крахмал растворимый, желатин, L-цистеин, железо(III) натриевую соль, тушь высококачественную и дистиллированную воду в заданном соотношении компонентов. Изобретение позволяет повысить точность определения антибиотикочувствительности культур возбудителя легионелеза - Legionella pneumophila. 3 табл., 8 пр.
Настоящее изобретение относится к области медицины, а именно к клинической лабораторной диагностике, и описывает способ конструирования полимерного иммуноглобулинового диагностикума для выявления Legionella pneumophila 1, 3 и 6 серогрупп, включающий получение иммунных кроличьих сывороток с последующей их сенсибилизацией на полимерный носитель в виде микросфер для обнаружения клеток штаммов L. pneumophila в реакции слайд-агглютинации, причем в качестве полимерного носителя антител используют полиакролеин, который на стадии полимеризации обрабатывают сафранином Т, а микросферы выполняют диаметром 1 мкм с содержанием альдегидных групп 0,4 мкмоль/г, затем носитель дополнительно обрабатывают 5% водным раствором танина при 37-40°C в течение трех часов и выдерживают 15 часов при комнатной температуре, отмывают водой посредством центрифугирования до отрицательной реакции в супернатанте на фенолы с FeCl3, после этого проводят сенсибилизацию микросфер легионеллезной кроличьей сывороткой, для этого 25 мг носителя суспендировали в 0,9 мл физиологического раствора и добавляли 0,1 мл разведенной (1:40) сыворотки, полученную суспензию перемешивают в течение 2-х часов при комнатной температуре, затем 15 часов при 4°C отмывают раствором хлористого натрия и суспендируют их в 1 мл того же раствора с 1% желатозой, проводят консервацию полученного диагностикума и разливают его в 5 мл емкости для использования и хранения. Способ обеспечивает обнаружение возбудителя Legionella pneumophila 1, 3 и 6 серогрупп с высокой специфичностью, демонстративностью и низкой себестоимостью. 4 з.п. ф-лы, 3 пр., 3 табл.
