Патенты автора Шендер Виктория Олеговна (RU)
Способ определения активности ферментов эксцизионной репарации оснований ДНК в клетках человека // 2789867
Изобретение относится к области биохимии. Описан способ определения активности фермента эксцизионной репарации оснований ДНК группы: АРЕ1, UNG2, SMUG1, MBD4, TDG, AAG, NEIL1, NTHL1 или OGG1 - в клетках человека. Он включает смешивание субстрата, буфера и клеточного экстракта в соотношении 1:1 и регистрацию изменения интенсивности флуоресценции субстрата с помощью флуориметра с последующей обработкой полученных кинетических кривых с помощью программы. Способ отличается тем, что в качестве субстрата используют ДНК-зонды: 5-FAM-GCTCA(F)GTACAGAGCTGTTTTTCAGCTCTGTACGTGAGCps-BHQ1-3, 5-FAM-GCTCA(U)GTACAGAGCTGTTTTTCAGCTCTGTACGTGAGCps-BHQ1-3, 5-FAM-GCTCA(εA)GTACAGAGCTGTTTTTCAGCTCTGTACGTGAGCps-BHQ1-3, 5-FAM-GCTCA(Tg)GTACAGAGCTGTTTTTCAGCTCTGTACGTGAGCps-BHQ1-3 или 5-FAM-GCTCA(oxoG)GTACAGAGCTGTTTTTCAGCTCTGTACGTGAGCps-BHQ1-3 - представляющие собой олигодезоксирибонуклеотиды, формирующие шпильку и несущие FRET-пару FAM/BHQ1 на концах цепи. Зонды также содержат в своем составе повреждение, специфичное для определяемого фермента. При этом для предотвращения неспецифической 3-5-экзонуклеазной деградации ДНК-зонда в клеточном экстракте 3-концевую межнуклеотидную фосфатную группу заменяют на тиофосфатную. Технический результат заключается в повышении точности и достоверности результатов определения активности ферментов репарации ДНК у человека, расширении функциональных возможностей известного способа, и применении этого способа для анализа активности в клетках человека. 4 з.п. ф-лы, 5 ил., 1 табл., 5 пр.
Изобретение относится к биотехнологии и генной инженерии. Нетранскрибируемый плазмидный вектор состоит из гена маркера селекции с промотором и терминатором, области инициации репликации и полилинкера, содержащего 15 или более уникальных гексануклеотидных сайтов расщепления эндонуклеазами рестрикции, 3 или более октануклеотидных сайтов расщепления эндонуклеазами рестрикции и два сайта узнавания Xcml, расположенные в центре области полилинкера в противоположной ориентации и образующие при расщеплении указанной рестриктазой непарные выступающие одиночные остатки дезокситимидина на 3′-концах цепей ДНК. Предложена также линеаризованная форма нетранскрибируемого вектора. Предложен также набор, содержащий нетранскрибируемый плазмидный вектор или нетранскрибируемый линейный вектор, лигазу и инструкцию по применению набора. Изобретение позволяет получить векторы, обеспечивающие возможность прямого клонирования ПЦР-продуктов, клонирования GC- AT-богатых последовательностей, модульной сборки генетических конструкций. 3 н. и 6 з.п. ф-лы, 6 ил., 4 табл., 10 пр.
