Патенты автора Шульга Алексей Анатольевич (RU)
СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ И АНАЛИЗА ЭКЗОСОМ // 2788198
Изобретение относится к клеточной биологии и медицине, в частности к способу выделения внеклеточных экзосом из биологических жидкостей животных и человека, а также идентификации молекул на их поверхности. Для осуществления указанного способа сначала получают образец биологической жидкости. Затем получают модифицированные субмикронные частицы, имеющие сродство к, по меньшей мере, одному маркеру и содержащие ядро из наночастиц в неорганической матрице из диоксида кремния, покрытое оболочкой. Далее осуществляют контакт указанного образца с модифицированными субмикронными частицами с образованием комплексов частица-экзосома. После чего отделяют комплексы частица-экзосома от несвязавшихся экзосом и модифицированных субмикронных частиц. При этом указанная субмикронная частица содержит в ядре наночастицы оксида железа, покрытые стрептавидином и полиэлектролитной оболочкой, образованной полиалиламиногирохлоридом и полиакриловой кислотой, а также направляющие аптамеры, иммобилизованные на поверхности субмикронных частиц и имеющие сродство к, по меньшей мере, одному маркеру, присутствующему в составе внеклеточной экзосомы. При этом отделение комплекса частица-экзосома осуществляют градиентом магнитного поля, а размер ядра субмикронных частиц выбирают диаметром от 300 нм до 500 нм, комплекс частица-экзосома содержит дарпин с флуоресцентной меткой, специфичный к мембранному белку EpCam, иммобилизованный на поверхности экзосом, а в качестве аптамера используют направляющие молекулы, специфичные к мембранному белку CD63. Изобретение позволяет расширить арсенал способов выделения и анализа циркулирующих экзосом и экзосомальных компонентов с целью создания новых методов диагностики и мониторинга онкологических заболеваний. 1 з.п. ф-лы, 5 ил., 1 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, в частности к радионуклидной диагностике, и может быть использовано для оценки неоадъювантной терапии рака молочной железы с гиперэкспрессией HER2/neu. Способ включает внутривенное введение радиофармпрепарата (РФП) и проведение сцинтиграфического исследования. Вводят РФП на основе меченных технецием-99m рекомбинантных адресных молекул DARPinG3 в дозе 3000 мкг с активностью 200-500 МБк, который готовят непосредственно перед введением в асептических условиях согласно лабораторному регламенту: в набор «CRS Isolink» для приготовления трикарбонильного технеция [99mTc(СО)3(Н2О)3]+ добавляют 1000 мкл элюата 99mTcO4- 2-4 ГБк и инкубируют в течение 30 минут при температуре 100°С, после инкубации 400 мкл трикарбонильного технеция добавляют к 3000 мкг DARPinG3 и инкубируют при температуре 60°С в течение 60 минут, затем выполняют очистку полученного соединения от белковых примесей и несвязавшихся с технецием молекул DARPinG3 с использованием очистительных колонок Sephadex G-25 Μ, радиохимические выход и чистоту определяют с помощью тонкослойной радиохроматографии (ТСРХ), анализ хроматограмм проводят с использованием хроматографа Hitachi Chromaster HPLC systems с радиоактивным детектором. Полученный после очищения препарат разбавляют в 10 мл стерильного 0,9% раствора NaCl, забирают через стерилизующий фильтр и медленно вводят пациенту, через 4 часа после введения выполняют однофотонную эмиссионную компьютерную томографию органов грудной клетки и верхнего этажа органов брюшной полости на двухдетекторной гамма-камере. Исследование выполняют перед началом лечения и затем после проведения второго курса системного лечения на каждом этапе оценивают накопление препарата в проекции молочных желез, регионарных лимфатических узлов и отдаленных органов и тканей, а также показатели опухоль/фон во всех имеющихся опухолевых очагах и при отсутствии аккумуляции препарата в проекции молочных желез и регионарных лимфатических узлов определяют положительную динамику терапии. Использование изобретения позволяет повысить точность, информативность и доступность радионуклидной диагностики рака молочных желез с гиперэкспрессией HER2/neu. 2 ил., 1 пр.
Изобретение относится к области белковой инженерии, биотехнологии и медицины. Описан рекомбинантный белок, имеющий последовательность SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 9, связывающийся с рецептор-связывающим доменом S-белка SARS-CoV-2, а также его применение в качестве средства, обладающего способностью связываться с рецептор-связывающим доменом S-белка SARS-CoV-2. Раскрыта рекомбинантная плазмида, обеспечивающая синтез в клетках Escherichia coli указанного рекомбинантного белка, причем указанная плазмида получена путем клонирования фрагмента ДНК с нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 8 или SEQ ID NO: 1 в плазмидный вектор pET39b по сайтам рестрикции NdeI/XhoI. Представлен рекомбинантный штамм Escherichia coli BL21(DE3), содержащий указанную рекомбинантную плазмиду – продуцент описанного рекомбинантного белка. Кроме того, представлен способ получения описанного рекомбинантного белка из биомассы указанного рекомбинантного штамма Escherichia coli BL21(DE3), при котором осуществляют разрушение клеток дезинтеграцией, удаляют клеточный дебрис, выделяют белок при помощи двухстадийной хроматографии, включающей стадию белковой денатурации/ренатурации на металлохелатном аффинном сорбенте, и очистку при помощи анионообменной хроматографии. Изобретение может найти применение в биотехнологии и медицине при создании лекарств против КОВИД-19. 5 н.п. ф-лы, 12 ил., 12 пр.
Группа изобретений относится к биологии и медицине. Раскрыта модифицированная частица для идентификации внеклеточной везикулы, содержащейся в образце биологической жидкости, имеющая сродство к по меньшей мере одному маркеру, присутствующему в составе внеклеточной везикулы, и состоящая из ядра из диоксида кремния, частиц золота, сорбированных на поверхности ядра, и направляющих дарпинов, иммобилизованных на частицах золота, и имеющих сродство к по меньшей мере одному маркеру, присутствующему в составе внеклеточной везикулы. Также раскрыты применение указанных модифицированных частиц и способ для идентификации внеклеточных везикул. Группа изобретений обеспечивает повышение чувствительности и специфичности детекции экзосомных маркеров. 3 н. и 7 з.п. ф-лы, 6 ил., 1 пр.
Способ радионуклидной диагностики операбельного рака молочной железы с гиперэкспрессией Her2/neu // 2702294
Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии и лучевой радионуклидной диагностике, и может быть использовано для диагностики операбельного рака молочной железы с гиперэкспрессией Her2/neu. Вводят инъекционную форму радиофармпрепарата на основе меченных технецием-99m рекомбинантных адресных молекул DARPin9_29, который изготавливают непосредственно перед введением. Для чего в асептических условиях 1 мл элюата 99mTcO4- 7 ГБк с помощью шприца добавляют в набор для приготовления трикарбонильного технеция и инкубируют при температуре 100°С в течение 30 минут. После инкубации 1000 мкл трикарбонила технеция добавляют к 334 мкл DARPin9_29 при концентрации раствора основного вещества 3,6 мг/л и инкубируют при температуре 40°С в течение 60 минут. Далее выполняют очистку полученного соединения от белковых примесей и несвязавшихся с технецием молекул DARPin9_29 с помощью очистительных колонок. Полученный после очищения препарат в дозе 500 МБк разбавляют в 10 мл физиологического раствора и через стерилизующий фильтр медленно вводят пациенту. Через 4 часа после введения препарата пациенту выполняют однофотонную эмиссионную компьютерную томографию на двухдетекторной гамма-камере. Оценивают полученные результаты и при визуализации участков гиперфиксации РФП в ткани молочных желез диагностируют злокачественную опухоль. Технический результат обеспечивает повышение специфичности, информативности и доступности диагностики операбельного рака молочной железы с гиперэкспрессией Her2/neu. 2 ил., 2 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии и лучевой радионуклидной диагностике, и может быть использовано для радионуклидной диагностики вторичной отечно-инфильтративной формы рака молочной железы с гиперэкспрессией Her2/neu с использованием рекомбинантных адресных молекул DARPin9_29. Вводят инъекционную форму радиофармпрепарата на основе меченных технецием-99m рекомбинантных адресных молекул DARPin9_29, который изготавливают непосредственно перед введением. Для чего в асептических условиях 1 мл элюата 99mTcO4- 7 ГБк с помощью шприца добавляют в набор для приготовления трикарбонильного технеция и инкубируют при температуре 100°С в течение 30 минут. После инкубации 1000 мкл трикарбонила технеция добавляют к 334 мкл DARPin9_29 при концентрации раствора основного вещества 3,6 мг/л и инкубируют при температуре 40°С в течение 60 минут. Далее выполняют очистку полученного соединения от белковых примесей и несвязавшихся с технецием молекул DARPin9_29 с помощью очистительных колонок. Полученный после очищения препарат в дозе 500 МБК разбавляют в 10 мл физиологического раствора и через стерилизующий фильтр медленно вводят пациенту. Через 4 часа после введения препарата пациенту выполняют однофотонную эмиссионную компьютерную томографию на двухдетекторной гамма-камере. Оценивают полученные результаты и при визуализации участков гиперфиксации РФП в ткани молочных желез диагностируют злокачественную опухоль. Технический результат обеспечивает повышение специфичности и информативности и доступности способа диагностики вторичной отечно-инфильтративной формы рака молочной железы с гиперэкспрессией Her2/neu. 1 ил., 1 пр.
Группа изобретений относится к биотехнологии и касается получения рекомбинантной барназы. Предложена рекомбинантная плазмида pET-STII-Ba, обеспечивающая синтез в клетках Escherichia coli барназы, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID №3. Указанная плазмида получена путем клонирования рекомбинантного фрагмента ДНК с нуклеотидной последовательностью SEQ ID №1 в плазмидный вектор pET39b по сайтам рестрикции NdeI/HindIII. Предложен рекомбинантный штамм Escherichia coli BL21(DE3)/pET-STII-Ba, содержащий рекомбинантную плазмиду pET-STII-Ba и продуцирующий барназу. Способ получения барназы, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID №3, из биомассы штамма Escherichia coli BL21(DE3)/pET-STII-Ba включает выделение белка из периплазмы клеток, выращенных при пониженной температуре 25ºС, и последующую его очистку при помощи хроматографии на фосфоцеллюлозе и катионообменнике. Группа изобретений позволяет увеличить и стабилизировать продукцию рекомбинантной барназы при накоплении последней в периплазме клеток, выращенных при пониженной температуре 25°С. 3 н.п. ф-лы, 4 ил., 6 пр.
Изобретение относится к биотехнологии. Предложен рекомбинантный таргетный токсин, специфичный к клеткам, экспрессирующим рецептор HER2. Рекомбинантный таргетный токсин содержит HER2-специфичный направляющий модуль, представленный кодирующей последовательностью HER2-специфичного белка класса дарпин DARPin, и токсический модуль в виде фрагмента псевдомонадного экзотоксина А ЕТА, соединенные между собой гибким гидрофильным 16-аминокислотным линкером, представленным последовательностью SEQ ID NO: 1, олигогистидиновую последовательность His6 и последовательность KDEL на С-конце молекулы. При этом рекомбинантный таргетный токсин представлен последовательностью SEQ ID NO: 2. Изобретение обеспечивает усиление токсического действия на клетки, экспрессирующие рецептор HER2, и повышение эффективности таргетной терапии. 1 з.п. ф-лы, 6 ил.
Изобретение относится к области биохимии, биотехнологии и медицины, в частности к способу получения рекомбинантного противоопухолевого токсина - химерного бифункционального белка, состоящего из адресного полипептида Darpin 9-29, специфичного к гистохимическому маркеру HER2/neu, и высокоактивной бактериальной рибонуклеазы барназы, соединенных гибким пептидным линкером. Для осуществления указанного способа получают рекомбинантный штамм Escherichia coli BL21(DE3)/pETDa путём встраивания в штамм E.coli BL21(DE3) плазмиды pETDa. Указанная плазмида получена путём клонирования рекомбинантного фрагмента ДНК, кодирующего указанный выше химерный белок, в плазмидный вектор pET22 по сайтам рестрикции NdeI/HindIII. Настоящее изобретение позволяет получить адресный белок, характеризующийся сниженным риском побочного воздействия за счет возможности моментальной отмены цитотоксичности, для нацеливающей на HER2/neu терапии опухолей, гиперэкспрессирующих рецептор HER2. 3 н.п. ф-лы, 8 ил., 3 табл., 11 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к рекомбинантному получению G-CSF, и может быть использовано для продуцирования G-CSF в клетках Е.coli. Для эффективной продукции белка в клетках Е.coli оптимизируют последовательность ДНК, кодирующую G-CSF. На основе полученной оптимизированной последовательности ДНК конструируют плазмиду pAS017, которая включает также NdeI/BamHI-фрагмент ДНК вектора рЕТМ-50 и имеет физическую карту, представленную на чертеже. 2 н.п. ф-лы, 1 ил., 1 табл., 3 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии и генетической инженерии и может быть использовано в ветеринарии для создания вакцин, регулирующих половую функцию животных. Предлагается рекомбинантная ДНК, кодирующая гибридный вакцинный белок GHbc, состоящий из нуклеокапсидного белка вируса гепатита В человека, слитого с гонадолиберином. Ген гибридного белка GHbc получен методом ПЦР и встроен в полилинкерный район плазмидного вектора pUC9. 2 н.п.ф-лы, 4 ил., 4 пр.
