Патенты автора ФРАЙЕР Бенджамин (US)
Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к получению трехмерных клеточных кластеров и их дифференцировке. Способ включает обработку плюрипотентных стволовых клеток, которые являются индуцированными плюрипотентными стволовыми клетками, клетками, полученными из ткани пуповины человека, партенотами, клетками, полученными из амниотической жидкости, или эмбриональными стволовыми клетками человека линии H1, H7, H9, SA002 или BG01v, культивированных в плоской адгезивной культуре вместе с хелатирующим агентом или ферментом, с высвобождением клеточных агрегатов из плоской адгезивной культуры. Далее осуществляют суспендирование клеточных агрегатов из плоской адгезивной культуры в культурную среду в присутствии ингибитора Rho-киназы без диссоциации клеточных агрегатов до единичных клеток. Затем осуществляют перенос суспензии клеточных агрегатов в динамическую суспензионную культуру и увеличение объема суспензии клеточных агрегатов в динамической суспензионной культуре с получением трехмерных клеточных кластеров, при этом трехмерные клеточные кластеры сохраняют плюрипотентность. Далее возможна дифференциация плюрипотентных клеточных кластеров в динамической суспензионной культуральной системе с получением популяции клеток-предшественников панкреатических клеток, популяции клеток-предшественников нейронов или популяции клеток-предшественников кардиомиоцитов. Изобретение позволяет расширить арсенал средств. 3 н. и 31 з.п. ф-лы, 20 табл., 95 ил., 16 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к дифференцировке клеточного кластера плюрипотентных стволовых клеток в клетки дефинитивной энтодермы. Способ включает получение клеточного кластера плюрипотентных стволовых клеток из плюрипотентных стволовых клеток, выращенных на плоской прикрепленной культуре, сформированного из скопления клеток или не выделенного из суспензий отдельных клеток, причем плюрипотентные стволовые клетки представляют собой плюрипотентные стволовые клетки неэмбрионального происхождения, индуцибельные плюрипотентные клетки, репрограмированные плюрипотентные клетки, клетки, выделенные из соматических клеток взрослого человека, индуцированные плюрипотентные стволовые клетки, клетки, полученные из амниотической жидкости человека, человеческие партеноты или клетки из линий эмбриональных стволовых клеток человека H1, H7, H9 или SA002. Затем осуществляют перемещение клеточного кластера плюрипотентных стволовых клеток из плоской прикрепленной культуры в динамичную суспензионную культуру без диссоциации клеточного кластера в отдельные клетки и культивирование клеточного кластера плюрипотентных стволовых клеток в динамической суспензионной культуре в культуральной среде, дополненной (i) 14-проп-2-ен-1-ил-3,5,7,14,17,23,27-гептаазатетрацикло[19.3.1.1~2,6-~.1~8,12.~]гептакоза-1(25),2(27),3,5,8(26),9,11,21,23-нонаен-16-оном и GDF8 или (ii) WNT3A и активином А или обработку клеточного кластера плюрипотентных стволовых клеток в динамической суспензионной культуре указанными веществами. Изобретение позволяет успешно дифференцировать клеточный кластер плюрипотентных стволовых клеток в клетки дефинитивной энтодермы. 2 н. и 16 з.п. ф-лы, 138 ил., 19 табл., 16 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к получению популяции клеток, экспрессирующих MAFA. Способ включает дифференцировку клеток человека, экспрессирующих маркеры, характерные для линии сформированной эндодермы, полученные из плюрипотентных стволовых клеток, которые представляют собой плюрипотентные стволовые клетки человека не эмбрионального происхождения, клетки из линии человеческих эмбриональных стволовых клеток H1, клетки из линии человеческих эмбриональных стволовых клеток H7, клетки из линии человеческих эмбриональных стволовых клеток H9, или клетки из линии человеческих эмбриональных стволовых клеток SA002, в клетки человека, экспрессирующие маркеры, характерные для линии панкреатической эндодермы. Затем осуществляют дифференцировку клеток человека, экспрессирующих маркеры, характерные для линии панкреатической эндодермы, в клетки человека, экспрессирующие маркеры, характерные для линии панкреатических эндокринных клеток, которые экспрессируют по меньшей мере один из NGN3, NEUROD, ISL1, PDX1, NKX6.1, PAX4 и PTF1-альфа; и обработку клеток человека, экспрессирующих маркеры, характерные для линии панкреатических эндокринных клеток, с ингибитором киназы, выбранным из группы, состоящей из алстерпауллона 2-цианоэтила; SU9516; алстерпауллона; Cdk1/2-ингибитора III; ингибитора казеинкиназы I; Akt-ингибитора IV; EGFR-ингибитора; MEK1/2-ингибитора; стауроспорин N-бензоил-, PKR-ингибитора и ингибитора IV тирозинкиназы рецептора PDGF. Изобретение позволяет расширить арсенал средств. 2 н. и 19 з.п. ф-лы, 16 ил., 7 табл., 9 пр.
Изобретение относится к области клеточной биологии и биотехнологии, конкретно к увеличению экспрессии инсулина и MAFA в панкреатических эндокринных клетках. Способ включает дифференцировку плюрипотентных стволовых клеток человека, полученных без разрушения человеческого эмбриона, или плюрипотентных стволовых клеток человека не эмбрионального происхождения, или клеток из линий человеческих эмбриональных стволовых клеток H1 или H7, или H9, или SA002, в клетки, экспрессирующие маркеры, характерные для линии панкреатических эндокринных клеток, и последующее культивирование в среде, содержащей добавленное количество ингибитора циклин-зависимой киназы, что приводит к увеличению экспрессии инсулина и MAFA. Изобретение позволяет увеличить экспрессию инсулина и MAFA в панкреатических эндокринных клетках. 2 н. и 18 з.п. ф-лы, 10 ил., 7 табл., 12 пр.
Изобретения касаются способов (варианты) формирования и дифференциации популяции клеток, в которой более 80% клеток популяции экспрессирует маркеры, характерные для линии сформированной эндодермы. Способ включает дифференциацию популяции эмбриональных стволовых клеток человека в среде DMEM или MCDB-131, содержащей активин А и лиганд Wnt, или GDF-8 и 14-проп-2-ен-1-ил-3,5,7,14,17,23,27-гептаазатетрацикло[19.3.1.1~2,6~.1~8,12~]гептакоза-1(25),2(27),3,5,8(26),9,11,21,23-нонаен-16-он, где концентрация глюкозы не превышает 10,5 ммоль/л, где эмбриональные стволовые клетки человека представляют собой клетки стабильных линий эмбриональных стволовых клеток человека, клетки стабильных линий эмбриональных зародышевых клеток человека, такие как клетки H1, клетки Н7, клетки Н9 или клетки BG01V. Изобретения могут быть использованы в лабораторной практике для создания in vitro функциональной экспрессирующей инсулин клетки, которая была бы более близка к β-клетке. 3 н. и 7 з.п. ф-лы, 9 ил., 2 табл., 4 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии. Описан способ закрепления плюрипотентных стволовых клеток человека на плоском носителе. Способ предусматривает получение суспензии плюрипотентных стволовых клеток и добавление к суспензии соединения, способного ингибировать активность Rho-киназы. Изобретение может быть использовано в медицине. 7 з.п.ф-лы, 46 ил., 14 табл., 26 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ увеличения экспрессии MAFA в клетках, экспрессирующих маркеры, характерные для линии панкреатических эндокринных клеток. Способ включает этапы культивирования клеток, экспрессирующих маркеры, характерные для линии панкреатических эндокринных клеток, в среде, содержащей достаточное количество ингибитора циклин-зависимой киназы, чтобы вызвать увеличение экспрессии MAFA. При этом в качестве ингибитора циклин-зависимой киназы используют этил-(6-гидрокси-4-фенилбензо[4,5]фуро[2,3-b])пиридин-карбоксилат. Изобретение может быть использовано в медицине. 2 з.п. ф-лы, 10 ил., 7 табл., 9 пр.
