Патенты автора Григорьева Диана Викторовна (RU)

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу определения функциональной активности системы комплемента крысы. Способ определения функциональной активности системы комплемента крысы включает проведение реакции лизиса эритроцитов человека группы А системы АВ0 [Е(А)], сенсибилизированных анти-А моноклональными IgM антителами [Е(А)мАт], и сыворотки в условиях вероналового солевого буфера (VBS2+), инкубирование полученной пробы, далее оценивают реакцию комплемент-зависимого лизиса Е(А)мАт. Вышеописанный способ позволяет повысить точность метода исследования функциональной активности классического пути системы комплемента, а также упростить регистрацию результатов анализа функциональной активности классического пути системы комплемента в рутинных исследованиях и адаптации способа для скрининг-исследований в условиях клинико-диагностических лабораторий. 5 ил., 2 табл., 2 пр.

Изобретение относится к диагностике, а именно к способу определения функциональной активности классического пути системы комплемента человека для прогноза тяжести течения системной воспалительной реакции. Способ определения функциональной активности классического пути системы комплемента человека для прогноза тяжести течения системной воспалительной реакции включает проведение реакции лизиса эритроцитов человека группы А системы АВ0 (Е(А)), сенсибилизированных анти-А моноклональными IgM антителами (Е(А)мАт) и сыворотки в условиях вероналового солевого буфера (VBS2+), инкубирование полученной пробы, далее оценивают реакцию комплемент-зависимого лизиса Е(А)мАт турбидиметрически, по снижению оптической плотности суспензии Е(А)мАт при длине волны 620 нм определяют степень лизиса эритроцитов в опытных пробах по калибровочному графику, где контроль Е(А)мАт представляет 0% лизиса, а контроль полного лизиса Е(А)мАт - 100% лизис, при определенных условиях, при этом повышенную функциональную активность классического пути системы комплемента человека отмечают при степени лизиса более 60%, при степени лизиса от 31% до 59% как нормальную и при степени лизиса менее 30% как пониженную функциональную активность системы комплемента человека. Вышеописанный способ позволяет повысить точность метода исследования функциональной активности классического пути системы комплемента, а также упростить регистрацию результатов анализа функциональной активности классического пути системы комплемента в рутинных исследованиях и адаптации способа для скрининг-исследований в условиях клинико-диагностических лабораторий. 5 ил., 2 табл., 2 пр.

Изобретение относится к клинической иммунологии и гемостазиологии и касается определения активности маннан-связывающих лектин-ассоциированных сериновых протеаз-1 и 2 (МАСП-1,2) в тесте коагуляции фибриногена. Способ определения активности маннан-связывающих лектин-ассоциированных сериновых протеаз-1 и 2 (МАСП-1 и МАСП-2) в тесте коагуляции фибриногена, включающий использование ЭДТА-плазмы в качестве источника фибриногена МАСП-1 и МАСП-2, а в качестве активатора лектинового пути системы комплемента используют дрожжевой маннан, реакцию активации МАСП запускают добавлением 25 мкл 10% раствора CaCl2 разведенного (1:31) к 25 мкл пулированной ЭДТА-плазмы крови здоровых доноров и 50 мкл трис-имидазолового буфера, рН 7,4, затем степень коагуляции фибриногена определяют как разность изменения мутности пробы при 450 нм после 45 минутной инкубации при 37°С, степень коагуляции оценивают относительно пробы, содержащей человеческий тромбин вместо исследуемой плазмы крови человека, максимальную абсорбцию фибринового сгустка, полученного с тромбином, при 450 нм принимают за 100% коагуляцию фибриногена, при этом коагуляцию до 25% считают низкой активностью МАСП-1 и МАСП-2 в тесте коагуляции фибриногена, от 26% до 49% - как среднюю активность МАСП-1 и МАСП-2 и выше 50% - как высокую активность МАСП-1 и МАСП-2 в тесте коагуляции фибриногена. Изобретение обеспечивает расширение арсенала лабораторных скрининг-тестов для диагностики гиперкоагуляции и угрозы тромбоза, обусловленных высокой функциональной активностью МАСП-1,2 в тесте коагуляции фибриногена. 4 табл., 2 пр.

Изобретение относится к клинической иммунологии и гемостазиологии. Раскрыт способ определения тромбинового пути активации системы комплемента (ТПАСК) по лизису эритроцитов человека группы А, включающий использование цитратной плазмы крови человека как источник циркулирующего тромбина, его природного субстрата - компонента С5 и белков мембрано-атакующего комплекса С6, С7, С8 и С9, протеолиз компонента С5 комплемента тромбином приводит к формированию мембрано-атакующего комплекса и лизису добавленной 1% суспензии эритроцитов, активность ТПАСК в пробе определяют турбидиметрически после 10-минутной инкубации при 37°С по калибровочному графику, где 100% лизис представляет собой полный лизис эритроцитов человека при добавлении воды, а контроль эритроцитов на спонтанный лизис - 0% лизиса, при лизисе до 30% эритроцитов человека считают нормальной активность тромбинового пути системы комплемента, от 30 до 60% - повышенная активность и свыше 60% лизиса - высокая активность тромбинового пути системы комплемента человека. Изобретение обеспечивает новый подход для определения активности тромбинового пути активации системы комплемента, а также упрощает тестирование и исключает многократный контакт оператора с биоматериалом. 3 ил., 7 табл., 9 пр.

Изобретение относится к лабораторной диагностике и может быть использовано для определения фибриногена при термокоагуляции цитратной плазмы и оценки его функциональности. Способ определения фибриногена при термокоагуляции цитратной плазмы и оценки его функциональности, включающий термокоагуляцию цитратной плазмы путем инкубации в течение 5 мин при 56°С с последующей фотометрической регистрацией при длине волны 450 нм, далее проводят расчет содержания фибриногена по формуле: ФГ (г/л) = ΔА450 × 5,29, где ΔА450 - изменение оптической плотности пробы при термокоагуляции цитратной плазмы; 5,29 - расчетный коэффициент перевода изменения оптической плотности опытной пробы в г/л фибриногена, представляющий собой отношение белка в преципитате фибриногена к изменению оптической плотности в пробе при термокоагуляции плазмы, рассчитывают функциональность фибриногена как разность между количествами фибриногена, определенными данным способом и по методу Клаусса, рассчитывают разницу в % и при разнице более 10% определяют как нарушенную функциональность фибриногена. Вышеописанный способ является простым, информативным и специфичным тестом для определения фибриногена и его функциональности, позволяет проводить широкий скрининг и выявлять людей, склонных к тромбозу. 1 ил., 3 табл.

Изобретение относится к клинической иммунологии и гемостазиологии и может быть использовано для оценки степени внутрисосудистого свертывания крови по функциональной активности тромбина, связанного с циркулирующими фибрин-мономерными комплексами, в тесте активации комплемента. Способ определения активности тромбина, связанного с циркулирующими фибрин-мономерными комплексами в тесте активации комплемента, включает использование цитратной плазмы крови человека, добавление к ней суспензии эритроцитов барана, инкубацию при 37°С в течение 10 минут, измерение оптической плотности пробы на фотометре для иммуноферментного анализа при 620 нм, определение активности тромбина по степени лизиса эритроцитов барана с использованием калибровочного графика, где 100% лизис представляет собой полный лизис эритроцитов барана при добавлении воды, а контроль на спонтанный лизис - 0% лизиса, при лизисе более 10% констатируют повышенную тромбиновую активность плазмы крови. 1 ил., 7 табл., 6 пр.

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ определения активности системы комплемента по классическому пути в тесте коагуляции фибриногена, включающий использование сыворотки крови человека в качестве источника комплемента и обработанной 9,1% поливинилпирролидоном с молекулярной массой 35000 цитратной плазмы в качестве источника протромбинового комплекса с фактором XII и фибриногеном. Степень коагуляции фибриногена определяют как разность изменения мутности пробы при 450 нм после 20-минутной инкубации при 37°С. Коагуляцию на уровне до 20% считают низкой активностью комплемента, от 20% до 49% - средней активностью комплемента и выше 49% - как высокую активность комплемента в тесте коагуляции фибриногена. Изобретение обеспечивает расширение арсенала лабораторных скрининг-тестов для диагностики гиперкоагуляции, обусловленной высокой функциональной активностью классического пути системы комплемента в тесте коагуляции фибриногена. 6 табл., 4 пр.

Изобретение относится к медицинской иммунологии и может быть использовано для определения функциональной активности классического пути системы комплемента. Для этого проводят реакцию лизиса эритроцитов барана, сенсибилизированных антителами кролика (ЕА), с 1% сывороткой крови человека. Реакцию проводят в течение 10 мин при температуре (37,0±0,5)°С. Регистрируют изменение оптической плотности методом турбидиметрии при длине волны 620 нм. Степень лизиса определяют по калибровочному графику. При степени лизиса менее 75% функциональную активность классического пути системы комплемента оценивают как пониженную. При степени лизиса от 75 до 85% указанную функциональную активность оценивают как нормальную. При степени лизиса более 86% указанную функциональную активность оценивают как повышенную. Изобретение обеспечивает повышение точности и сокращение времени определения функциональной активности классического пути системы комплемента в условиях клинико-диагностических лабораторий. 5 ил., 2 табл., 3 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике и может быть использовано для определения фибриногена при рекальцификации цитратной плазмы и оценки его функциональности. Суть способа заключается в рекальцификации плазмы крови хлоридом кальция с последующей регистрацией степени коагуляции на фотометре для иммуноферментного анализа. С целью повышения точности теста используют в качестве активатора фибринстабилизирующего фактора полиэтиленгликоль с молекулярной массой 3350. Запускают реакцию в параллельных 2 сериях добавлением 0,25 М раствора хлорида кальция к пробе, содержащей цитратную плазму, ПЭГ-3350 и буфер VBS с рН 7,4, тщательно перемешивают, измеряют оптическую плотность проб, далее инкубируют в течение 60 мин при 37°С, в первой серии опыта определяют содержание белка в фибриновом сгустке стандартным способом с использованием биуретового реактива, во второй серии опыта определение коагуляции плазмы проводят фотометрически по изменению мутности проб при длине волны 450 нм с интервалами измерения 0 и 60 мин, расчет содержания фибриногена проводят по формуле: ФГ (г/л) = ΔА450 × 5,12, где: ΔА450 - изменение оптической плотности пробы во второй серии, при коагуляции плазмы; 5,12 - коэффициент для перевода изменений оптической плотности пробы при коагуляции плазмы в г/л, представляющий собой отношение белка в фибриновом сгустке к изменению оптической плотности в пробе при коагуляции плазмы, рассчитывают функциональность фибриногена как разность между количествами фибриногена, определенными данным способом и по методу Клаусса, рассчитывают разницу в % к белку в фибриновом сгустке и при разнице более 10% определяют как нарушенную функциональность фибриногена. Использование данного способа позволяет определить количество фибриногена и его функциональность, что дает возможность проводить широкий скрининг и выявлять людей, склонных к тромбозу. 5 табл., 1 ил.

Изобретение относится к клинической иммунологии и гемостазиологии и касается определения чувствительности эритроцитов человека к лизису при активации системы комплемента по тромбиновому пути. Для определения чувствительности эритроцитов человека к лизису при активации системы комплемента по тромбиновому пути используют цитратную плазму с высокой активностью тромбина, связанного с фибрином. Для ингибирования активации комплемента по одному из известных трех путей (классическому, альтернативному или лектиновому) используют цитрат натрия в качестве хелатора для связывания Са2+ и Mg2+. В присутствии высокой активности тромбина, связанного с фибрином, активируется компонент С5 и формируется мембрано-атакующий комплекс, который определяют по лизису эритроцитов человека. Степень лизиса ЭЧ определяют по калибровочному графику, где 100% лизис представляет собой полный лизис эритроцитов человека при добавлении воды, а контроль эритроцитов на спонтанный лизис - 0% лизиса. Параллельно определяют стандартным методом группы крови ЭЧ. Наиболее чувствительными к лизису оказались эритроциты человека с группой крови А, на втором месте ЭЧ с группой крови АВ, на третьем месте ЭЧ с группой крови В. Наиболее устойчивыми оказались эритроциты человека с 0 группой крови. Данный тест может быть использован для персонифицированного прогнозирования тяжести течения реперфузионного синдрома при активации комплемента по тромбиновому пути активации системы комплемента, а также для выбора тактики лечения при данных патологических ситуациях. 2 ил., 4 табл..

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической иммунологии, и может быть использовано для оценки литической активности множественно модифицированных липопротеинов низкой плотности. Способ включает приготовление преципитата из сыворотки крови человека путем инкубации супернатанта, полученного после предварительного осаждения множественно модифицированных липопротеинов низкой плотности (ммЛНП) буфером, содержащим 20% поливинилпирролидона с молекулярной массой 35000 (ПВП-35000), в течение 30 мин при 4°С. Затем образовавшиеся агрегаты иммунных комплексов, содержащих ммЛНП (ИК-ммЛНП) осаждают центрифугированием при 4°С в течение 10 мин при 31000 g, декантируют, полученный преципитат растворяют в буфере без ПВП-35000 и пределяют содержание холестерина в иммунных комплексах. К пробам ммЛНП и ИК-ммЛНП добавляют стандартизованные эритроциты барана, инкубируют в течение 24 ч при 37°С, рассчитывают коэффициент удельной литической активности (КУЛА) ммЛНП и ИК-ммЛНП как отношение степени лизиса к холестерину в этих комплексах, сопоставляют величину КУЛА ммЛНП и ИК-ммЛНП у обследуемого человека. В случае снижения данного коэффициента ИК-ммЛНП по сравнению с КУЛА ммЛНП оценивается как нейтрализация литической активности. При противоположном эффекте, при тенденции к увеличению данного коэффициента ИК-ммЛНП, оценивается как возрастание литической активности. Равные величины КУЛА (ммЛНП) и КУЛА (ИК-ммЛНП) свидетельствуют о том, что аутоантитела, связываясь с ммЛНП в иммунных комплексах, не влияют на литическую активность. Использование данного изобретения позволяет оценить характер аутоиммунной реакции организма на ммЛНП для раннего прогноза течения и контроля эффективности патогенетической терапии атеросклероза.1 пр., 7 табл., 1 ил.
Изобретение относится к лабораторной диагностике, а именно к клинической иммунологии. Cпособ определения стабилизации C3-конвертазы классического пути активации комплемента человека осуществляется путем проведения реакции лизиса эритроцитов барана 0,8% сывороткой крови человека в течение 10 мин. Реакцию останавливают добавлением буфера, содержащего 10 мМ этилендиаминтетрауксусную кислоту, определяют степень лизиса эритроцитов в контрольной пробе. Опытную пробу дополнительно инкубируют в течение 30 мин при 37°C, определяют степень лизиса, рассчитывают активность C3-конвертазы как разность между опытной и контрольной пробами, при разнице более 10% оценивают как аутоиммунное патологическое состояние. Использование простого и быстрого в осуществлении способа позволяет выявлять доклинические состояния иммунодефицита, может служить специфическим маркером для иммуномодулирующей терапии, проводить углубленное исследование патогенеза аутоиммунных заболеваний. 3 табл., 3 пр.
Изобретение относится к лабораторной диагностике, а именно к клинической иммунологии, и может быть использовано для определения функциональной активности ионизированного кальция (ФАИ Ca2+) в сыворотке крови человека. Способ определения ФАИ Ca2+ основан на проведении реакции лизиса эритроцитов барана 10% сывороткой крови человека при температуре 37°C в течение 10 мин в присутствии 0,55 мМ этиленгликольтетрауксусной кислоты в буферном растворе в течение 10 мин. После инкубации определяют степень ингибирования лизиса эритроцитов, при наличии ингибирования активности комплемента менее 30% оценивают повышенную функциональную активность ионизированного кальция в организме человека, от 31% до 70% - нормальную, более 71% - пониженную. Использование простого и быстрого в осуществлении способа позволяет выявлять доклинические состояния иммунодефицита, может служить специфическим маркером для иммуномодулирующей терапии, проводить углубленное исследование патогенеза аутоиммунных заболеваний, дает возможность их ранней профилактики и позволяет контролировать эффективность проводимой терапии. 5 пр., 6 табл.

 


Наверх