Патенты автора Кравченко Юлия Евгеньевна (RU)

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложена гетерологичная ДНК, предназначенная для введения в геном вируса “дикого” штамма Herpesvirus saimiri, включает в себя генетические последовательности, кодирующие парные химерные рецепторы против опухолевых антигенов CD44 и CD133, фланкированная участками протяженностью 300-900 пар нуклеотидных оснований, гомологичных тому участку генома Herpesvirus saimiri, в который производится интеграция целевого фрагмента посредством гомологичной рекомбинации. Также предложен рекомбинантный штамм Herpesvirus saimiri, содержащий в своем геноме последовательность указанной ДНК, предназначенный для быстрого получения пролиферирующих популяций аутологичных Т-лимфоцитов, экспрессирующих парные химерные антигенные рецепторы против антигенов CD44 и CD133. Изобретения могут быть использованы в исследовательских и диагностических целях для эффективного получения генетически-модифицированных иммортализованных первичных Т-лимфоцитов для терапии злокачественных новообразований, в частности глиобластом. 2 н. и 3 з.п. ф-лы, 5 ил.
Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к набору олигонуклеотидных праймеров для количественной детекции генетического материала Herpesvirus Saimiri штамма С488 или его модифицированных производных в клеточных культурах методом количественной полимеразной цепной реакции. Заявленное изобретение позволяет быстро, чувствительно и специфично определять инфекцию клеточных культур вирусом Herpesvirus Saimiri, в том числе при получении культур иммортализованных Т-лимфоцитов человека, и может быть использовано в лабораторной и клинической практике для детектирования присутствия указанного вируса в клеточных культурах или ином исследуемом биоматериале. 1 табл., 1 пр.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу получения рекомбинантных герпесвирусов для одновременной трансдукции и иммортализации первичных Т-лимфоцитов и НК-клеток. Рекомбинантная плазмидная ДНК pUC-HVS-OFP состоит из следующих ключевых генетических элементов: гена устойчивости к пуромицину (рас); гена оранжевого флуоресцентного белка (OFP); фланкирующих участков (600 п.н.), гомологичных области vCD59 генома HVS; гена устойчивости к антибиотику ампициллину (AmpR) и бактериального промотора гена устойчивости к ампициллину (AmpR promoter); ориджина репликации бактериофага f1 (ori); промотора цитомегаловируса (CMV). Пермиссивную к литической инфекции вирусом Herpesvirus Saimiri культуру клеток заражают штаммом вируса Herpesvirus Saimiri HVS-C488. Другую перевиваемую линию клеток трансфицируют смесью из экспрессионных плазмид и плазмиды pUC-HVS-OFP. Затем инфицированную Herpesvirus Saimiri пермиссивную клеточную культуру и трансфицированную экспрессионными плазмидами клеточную культуру смешивают и подвергают ко-культивации. Совмещение производительной наработки вируса в клетках линий, пермиссивных к литической инфекции HVS, с высокой эффективностью трансфекции клеток экспрессионными плазмидами, кодирующими генетические последовательности, предназначенные для введения в геном «дикого» штамма вируса, позволяет получить рекомбинантные герпесвирусы с повышенной эффективностью наработки. 2 н. и 4 з.п. ф-лы, 6 ил.

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложена система на основе лентивирусной ДНК-конструкции для стабильной экспрессии опухоль-ассоциированных антигенов с последующим их транспортом в эндосому через систему комплекса MHC II. Данное изобретение может найти дальнейшее применение в стимулировании иммунной системы к узнаванию опухолевых клеток. 2 з.п. ф-лы, 3 ил., 1 табл.

Настоящее изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ получения цитотоксических Т-лимфоцитов, экспрессирующих химерный рецептор. Согласно представленному способу для трансдукции Т-лимфоцитов используют рекомбинантные лентивирусные частицы, псевдотипированные поверхностными гликопротеинами вакцинного штамма вируса кори, а наработку лентивирусных частиц осуществляют с помощью CD46-дефицитной линии-упаковщика, полученной с помощью экспрессионной конструкции для экспрессии фермента CRISPR/Cas9 и направляющей РНК (sgРНК), комплементарной участку одного из экзонов гена CD46. Преимущество способа обусловлено эффективностью наработки лентивирусных частиц за счет сведения к минимуму негативных эффектов формирования синцития и реабсорбции вируса клетками упаковывающей линии. 7 ил., 2 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению лентивирусного вектора для экспрессии химерного антигенного рецептора (CAR) на основе VHH-антитела к CD47 в Т-клетках человека, и может быть использовано в медицине. Полученные нацеленные Т-клетки, презентирующие CAR к CD47, характеризуются высоким уровнем экспрессии CAR, низкой иммуногенностью и увеличенным временем циркуляции в организме и могут быть использованы для эффективной иммунотерапии злокачественных новообразований. 3 ил., 3 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложена генетическая конструкция для индукции пролиферации периферических моноцитов и дендритных клеток in vitro, полученных из крови человека, включающая последовательности, кодирующие транскрипционные факторы с-Мус и BMI1, а также их связывающую саморасщепляющуюся пептидую последовательность из вируса Thosea asigna Т2А, обеспечивающую полицистронную экспрессию транскрипционных факторов под контролем одного промотора EF1alpha. Указанная конструкция получена на основе экспрессионного плазмидного лентивирусного вектора pLEF1a-tagRFP, включающего ряд регуляторных последовательностей: 5’ и 3’ LTR длинные концевые повторы, Rev зависимый элемент (RRE или Rev-response element), Env - регуляторную последовательность, обеспечивающую упаковку вирусного генома в структуру вирусной частицы с образованием вириона, сРРТ - центральный полипуриновый тракт, посттранскрипционный регуляторный элемент WPRE, промотор EF1alpha. Изобретение обеспечивает эффективную конститутивную экспрессию транскрипционных факторов с-Мус и BMI1 при введении указанной конструкции в периферические моноциты и дендритные клетки. 3 ил., 3 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано в терапии онкологических заболеваний. Описан универсальный вспомогательный плазмидный экспрессионный лентивирусный вектор для получения высоких титров вирусных частиц, содержащих ген Vpx, включающий в качестве базовых элементов, обеспечивающих функционирование вектора, последовательность вирион-ассоциированного белка Vpx, содержащую С-концевой HIV-1 gag/pol мотив и FLAG последовательность и объединенную с последовательностью гена трансактиваторного белка Rev через специфическую последовательность Т2А, обеспечивающую расщепление слитых белков во время процесса трансляции мРНК трансгена; в качестве регуляторных элементов- RSVпромотор/энхансер [rous sarcoma virus) и NES (nuclear export signal)- сигнал экспорта из ядра в цитоплазму. 4 ил., 1 табл., 3 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен селективный бифункциональный белковый комплекс, подавляющий рост и/или вызывающий апоптоз раковых стволовых клеток, состоящий из двух фрагментов вариабельных частей VHH-антител верблюжьих, способных распознавать и избирательно связываться с клеточными рецепторами CD47 и CD44, где фрагменты соединены в единую полипептидную цепь при помощи полипептидного линкера. Данный комплекс обладает повышенной по сравнению с традиционными моноклональными антителами специфичностью, биодоступностью, высокоэффективно и избирательно поражает раковые стволовые клетки, оказывая при этом минимальное воздействие на нормальные клетки организма пациента. 1 з.п. ф-лы, 2 пр.

Изобретение относится к области биохимии и биотехнологии, в частности к способу создания и селекции библиотеки модифицированных аптамеров для различных мишеней, в частности к человеческому клеточному рецептору CD47. Представленный способ характеризуется тем, что синтезируют комбинаторные библиотеки олигонуклеотидов, состоящих из константных участков, необходимых для амплификации фрагментов библиотеки в процессе отбора, и вариабельного участка, включающего модифицированные реакцией азид-алкинового присоединения нуклеотиды, представляющие собой неканонические нуклеотиды, такие как 5'-замещенные дезоксиуридины, инкубируют с белком-мишенью и отбирают аффинные варианты аптамеров, после чего проводят амплификацию с использованием неканонических минимально-модифицированных нуклеотидов, с последующим проведением реакции азид-алкинового присоединения для получения модификаций, представленных в исходной библиотеке, и дальнейший отбор аффинных мишень-специфичных молекул. Способ позволяет быстро отобрать сложномодифицированные аптамеры к различным мишеням с повышенным потенциалом связывания. 3 з.п. ф-лы, 3 ил.
Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к терапевтическому бифункциональному агенту, подавляющему рост раковых стволовых клеток за счёт блокады опухолевых рецепторов CD47 и ERBB2. Указанный агент состоит из двух фрагментов VHH верблюжьих антител, первый из которых способен распознавать и избирательно связываться с CD47, а второй – с ERBB2. При этом фрагменты соединены между собой с помощью полипептидного линкера (Gly4Ser)4 или иного линкера, позволяющего разнести в пространстве VHH-фрагменты таким образом, чтобы обеспечить беспрепятственное связывание каждого из них со своим белком-мишенью. Настоящее изобретение позволяет повысить специфичность, биодоступность, эффективность и избирательность антител, подавляющих рост раковых стволовых клеток, снизив при этом воздействие на нормальные клетки организма пациента. 2 з.п. ф-лы, 2 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен экспрессионный плазмидный лентивирусный вектор для гетерологичной экспрессии рекомбинантного человеческого белка CD44 в клетках млекопитающих. Предложенный вектор содержит последовательность внеклеточного домена рецептора CD44, последовательность, кодирующую пептидный участок распознавания и расщепления протеазой TEV, последовательность гена флуоресцентного красного белка tagRFP, выступающего в качестве селективного маркера, которые находятся в одной рамке считывания под контролем промоторного региона фактора элонгации трансляции 1 человека (EF1alpha), обеспечивающего высокий уровень продукции мРНК. Предложенный вектор обеспечивает получение высокопродуктивной и стабильной системы экспрессии белка CD44 в клетках млекопитающих, в частности в клетках HEK293, и может быть использован в биотехнологии для получения белка CD44. 1 з.п. ф-лы, 10 ил.

Изобретение относится к области биотехнологии и медицины. Предложен аптамер, специфичный к внеклеточному гликозилированному домену человеческого рецептора CD47, способный блокировать его взаимодействие с природным лигандом SIRP-alpha. Данное изобретение может найти применение в терапии. 4 ил.

Изобретение относится к области биотехнологии и биохимии, конкретно к векторной конструкции. Описанная репортерная система на основе лентивирусных репортерных конструкций позволяет с высокой точностью зарегистрировать взаимодействия исследуемых белков в клетке животного, растения, гриба и бактерии, а также зарегистрировать явление транспортировки белка из одной клетки в другую. Изобретение основано на двух генетических конструкциях в виде плазмидной ДНК, содержащих части гена люциферазы, выделенной из светлячка (род. Photinus) Photinus pyralis. 2 з.п. ф-лы, 4 ил.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к плазмидному лентивирусному вектору для гетерологичной экспрессии рекомбинантного человеческого белка CD47 в клетках млекопитающих. Вектор содержит высокофункциональный цитомегаловирусный промотор (CMV), последовательность внеклеточного домена рецептора CD47, последовательность распознавания цистеиновой протеазой TEV, последовательность флуоресцентного белка tagRFP, выступающего в качестве селективного маркера. Все три последовательности находятся в одной рамке считывания под контролем данного промотора. Изобретение позволяет получить высокопродуктивную и стабильную систему экспрессии белка для дальнейшего производства его очищенной формы. 1 з.п. ф-лы, 1 пр., 4 ил.

Изобретение относится к области генной инженерии, конкретно к наборам синтетических олигонуклеотидов, и может быть использовано для определения уровней экспрессии основных изоформ гена PDLIM4. Предложен набор синтетических олигонуклеотидов для определения статуса PDLIM4 методом ПЦР в реальном времени. Уровень экспрессии PDLIM4 определяют в ходе ПЦР-РВ за счет определения скорости накопления флуоресцентного продукта реакции. ПЦР проводят с использованием набора олигонуклеотидов, состоящего из концевых праймеров для проведения амплификации целевого участка кДНК PDLIM4 - области стыка экзонов 2-3 (для определения количества суммарных изоформ PDLIM4) и экзонов 6-7 (для определения полноразмерной изоформы PDLIM4). Набор олигонуклеотидов содержит разрушаемый в ходе реакции флуоресцентно-меченый зонд. Изобретение позволяет быстро, чувствительно и специфично определять уровни экспрессии полноразмерной изоформы гена PDLIM4, а также тотальной совокупности изоформ PDLIM4, в том числе в клиническом резекционном либо биопсийном материале, полученном от пациентов с опухолями молочной железы, для более точного установления фенотипических характеристик заболевания. 1 табл., 1 ил.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к лентивирусной доставке апоптина в опухолевые ткани, и может быть использовано в медицине. Способ включает получение лентивирусного конструкта, экспрессирующего модифицированный апоптин, слитый с секреторным сигналом лактотрансферрина и трансдукторным сигналом (ST-CTP-апоптин), с последующим получением рекомбинантных лентивирусных частиц, дефектных по репликации и несущих модифицированный апоптин, которые затем вводятся в Т-лимфоциты (TILs), полученные при хирургическом удалении опухоли или в процессе получения биопсии, которые обладают способностью проникать в опухолевые ткани. Далее полученные TILs аутотрансплантируют указанному пациенту. Изобретение позволяет повысить способность апоптина проникать в опухолевые клетки и оказывать онколитический эффект в отношении всех клеток опухоли. 2 ил., 3 пр.

Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии, и предназначено для определения субтипа рака молочной железы. Определяют уровень экспрессии RIL (PDLIM4) в образце опухолевой ткани пациента с помощью технологии секвенирования следующего поколения NGS или методами Нозерн-гибридизации и ПЦР в реальном времени. При снижении экспрессии RIL (PDLIM4) более чем в два раза в сравнении с его уровнем в нормальных тканях диагностируют субтип злокачественных новообразований молочной железы. Изобретение обеспечивает эффективный способ диагностики субтипа рака молочной железы - опухолей, характеризующихся неполной эпителиально-мезенхимальной транзицией и относительно малоинвазивных. 2 ил., 1 пр.

 


Наверх