Патенты автора ЖОЛИВЭ Эдмон (FR)
ПЛАЗМИДА БЕЗ УСТОЙЧИВОСТИ К АНТИБИОТИКУ // 2548809
Настоящее изобретение относится к биотехнологии и представляет собой экспрессионную плазмиду без устойчивости к антибиотику, которая содержит полинуклеотид, кодирующий белок-репрессор cI. Экспрессия указанного белка-репрессора регулирует экспрессию токсичного генного продукта, встроенного в несущественный участок генома хозяина. Настоящее изобретение также раскрывает сконструированную клетку-хозяин, относящуюся к грамотрицательным бактериям, содержащую указанную плазмиду. Клетку-хозяин используют для получения плазмиды либо для получения некоего белка или иммуногена, если экспрессионная плазмида дополнительно содержит гены, кодирующие указанные белок или иммуноген. Способ получения экспрессионной плазмиды и способ получения белка или иммуногена проводят в несколько стадий. Сначала создают штамм клеток-хозяев, относящихся к грамотрицательным бактериям, встраиванием путем аллельной замены гена, кодирующего токсичный продукт, в несущественный участок хромосомы хозяина. Затем проводят конструирование ДНК-плазмиды, содержащей ген, кодирующий белок-репрессор cI, и, при необходимости, ген, кодирующий белок или иммуноген. После чего полученные клетки-хозяин трансформируют указанной плазмидой и выращивают в присутствии сахарозы при температуре 30-42 ºC. И, наконец, извлекают экспрессионную плазмиду, белок или иммуноген. Настоящее изобретение позволяет осуществлять контроль токсичного гена, локализованного на хромосоме, с помощью репрессора, локализованного на плазмиде при отсутствии селекционного давления антибиотиком. 4 н. и 29 з.п.ф-лы, 31 ил., 8 табл., 10 пр.
