Патенты автора Усакин Лев Алексеевич (RU)
Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для рекомбинантного получения тканевого фактора человека (чТФ). Конструируют плазмиду pHYP-10ETFCS6 длиной 5912 п.о. с физической картой, представленной на Фиг. 2, для экспрессии в бактерии рода Escherichia предшественника мутеина [C245S] чТФ, содержащего отщепляемый N-концевой лидерный пептид, содержащий декагистидиновый кластер и последовательность узнавания энтерокиназы, слитую в рамке с последовательностью, кодирующей указанный мутеин, слитый в рамке с последовательностью, кодирующей дополнительный неотщепляемый C-концевой пептид, содержащий гексагистидиновый кластер. Способ получения предшественника мутеина [C245S] чТФ включает культивирование бактерии-продуцента в питательной среде, выделение телец включения, солюбилизацию белка-предшественника, металлохелатную хроматографию в денатурирующих условиях, рефолдинг и диафильтрацию раствора белка. Способ получения зрелого мутеина [C245S] чТФ, включает отделение N-концевого лидерного пептида от указанного предшественника мутеина с использованием энтерокиназы и выделение целевого белка. Изобретение позволяет повысить уровень биосинтеза и выход прокоагуляционно активного чТФ. 6 н. и 3 з.п.ф-лы, 5 ил., 1 табл., 7 пр.
