Патенты автора ДЖЕННАРИ, Джованни (IT)

Изобретение относится к области биохимии и биотехнологии. Представлена гиалуронидаза из Streptomyces koganeiensis АТСС 31394, включающая N-концевую аминокислотную последовательность AGENGATTTFDGPVA и имеющая молекулярную массу 21,6 кДа, изоэлектрическую точку (pI) в диапазоне от 4,4 до 4,8 и ферментативную активность свыше 40000 МЕ/мг и менее 50000 МЕ/мг. Описана фармацевтическая или ветеринарная композиция, содержащая указанную гиалуронидазу в смеси с по меньшей мере одним подходящим вспомогательным веществом и/или носителем для лечения заболеваний или состояний, для которых требуется или полезно разложение гиалуроновой кислоты в тканях или органах. Предложено применение указанной гиалуронидазы в качестве реагента для количественного/качественного определения гиалуроновой кислоты. Способ получения гиалуронидазы по настоящему изобретению, включающий следующие стадии: a) концентрация ультрафильтрацией через фильтр с отсечением 10 кДА, диализ супернатанта, полученного после ферментации Streptomyces koganeiensis АТСС 31394, хроматография на слабом катионообменнике элюированием колонки натрий-ацетатным буфером при рН 4,5 и выделение белковой фракции с гиалуронидазной активностью; b) диафильтрация и хроматография на сильном анионообменнике белковой фракции с гиалуронидазной активностью со стадии a), выделение белковой фракции с гиалуронидазной активностью элюированием колонки буфером TRIS-HC1 и NaCl при рН 8 и выделение белковой фракции с гиалуронидазной активностью; c) хроматография на сильном катионообменнике элюированием колонки буфером фосфата натрия при рН 4,8 белковой фракции с гиалуронидазной активностью со стадии b) и выделение белковой фракции с гиалуронидазной активностью; d) хроматография на сильном анионообменнике белковой фракции с гиалуронидазной активностью со стадии c) после доведения рН до значения 5 и элюирование колонки буфером ацетата натрия, затем понижение рН до 4 и элюирование колонки буферным раствором ацетата натрия, таким образом получая две различные белковые фракции с различной гиалуронидазной активностью, и выбор одной, проявляющей более высокую гиалуронидазную активность. Изобретение позволяет получить выделенный белок гиалуронидазы, проявляющей более высокую гиалуронидазную активность. 4 н. и 7 з. п. ф-лы, 9 ил., 5 табл., 3 пр.

 


Наверх