Патенты автора ОРЛОВА Надежда Александровна (RU)
Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для рекомбинантного получения фактора свертываемости крови VIII (FVIII) человека с делецией В-домена. Конструируют плазмиду для экспрессии рекомбинантного FVIII человека с делетированным В-доменом, в клетках СНО, нокаутных по гену дигидрофолатредуктазы (DHFR), включающую область начала репликации плазмиды pUC, открытую рамку считывания бета-лактамазы (bla) и прокариотический промотер гена bla, участок терминального повтора вируса Эпштейн-Барр человека (EBVTR), функциональные элементы гена фактора элонгации 1 альфа китайского хомячка, последовательность Козак; открытую рамку считывания гена FVIII человека с делетированным В-доменом; внутренний сайт связывания рибосом (IRES) вируса EMCV; открытую рамку считывания DHFR, экспрессирующуюся в составе бицистронной мРНК вместе с геном, кодирующим FVIII человека с делетированным В-доменом (IRES DHFR). Полученной плазмидой трансформируют клетку СНО с получением клетки-продуцента указанного фактора. Изобретение позволяет существенно повысить эффективность продукции в клетках СНО и сократить затраты на получение фармацевтически значимого рекомбинантного FVIII человека с делецией В-домена. 3 н. и 7 з.п. ф-лы, 6 ил., 4 табл., 4 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для рекомбинантного получения фолликулостимулирующего гормона (ФСГ) человека. Конструируют плазмиду для экспрессии в клетках СНО рекомбинантного ФСГ человека, включающую область начала репликации плазмиды pUC, открытую рамку считывания бета-лактамазы (bla) и прокариотический промотор гена bla, участок терминального повтора вируса Эпштейн-Барр человека (EBVTR), функциональные элементы гена фактора элонгации 1 альфа китайского хомячка, последовательность Козак; открытые рамки считывания альфа- и бета-субъединиц ФСГ человека с блоками стоп-кодонов; внутренний сайт связывания рибосом (IRES) вируса EMCV; открытую рамку считывания дигидрофолатредуктазы (DHFR), экспрессирующуюся в составе трицистронной мРНК вместе с геном, кодирующим альфа- и бета-субъединицы ФСГ человека. Полученной плазмидой трансформируют клетку СНО с получением клетки-продуцента ФСГ. Клетка-продуцент может быть дополнительно трансформирована плазмидой, экспрессирующей бета-субъединицу ФСГ человека. Изобретение позволяет существенно повысить эффективность продукции ФСГ человека в клетках СНО. 4 н. и 11 з.п. ф-лы, 7 ил., 3 табл., 10 пр.
Изобретение относится к биотехнологии и генетической инженерии. Предложен экспрессионный плазмидный вектор для моноцистронной гетерологичной экспрессии рекомбинантных белков в клетках яичника китайского хомячка (СНО), обладающий свойством высокочастотной интеграции экспрессионной кассеты в указанных клетках, в следующей последовательности содержащий область начала репликации плазмиды pUC с функциональным геном устойчивости к ампициллину; участок терминального повтора вируса Эпштейн-Барр человека (EBVTR); функциональный промотор гена фактора элонгации 1 альфа китайского хомячка, фланкированный 5′ нетранслируемой областью этого гена; участок для клонирования открытой рамки считывания рекомбинантного белка (полилинкер); функциональный терминатор гена фактора элонгации 1 альфа китайского хомячка, фланкированный 3′ нетранслируемой областью этого гена; промотор, функционирующий в клетках млекопитающих; ген устойчивости к антибиотику; и функциональный терминатор гена устойчивости к антибиотику. Также предложена линия клеток - продуцентов рекомбинантного белка и способ получения рекомбинантного белка с использованием указанных клеток. Изобретение позволяет увеличить стабильность и продуктивность систем экспрессии рекомбинантных белков. 3 н. и 10 з.п. ф-лы, 7 ил., 6 табл., 8 пр.
