Патенты автора Марушева Юлия Алексеевна (RU)
Изобретения относятся к области биотехнологии и касаются набора синтетических олигонуклеотидных праймеров и способа его использования. Представленный набор включает две пары праймеров, имеющих следующую структуру - FIV F: 5′-AAGAGTCCCAAATATGCCATAGG-3′ и FIV R: 5′-TCCATCCAAATTGCTACTGTTC-3′; FeLV F: 5′-GAATAAACCTCTTGCTGTTTGC-3′ и FeLV R: 5′-AATCAGATCGAATGACAGAGACAC-3′. Представленные праймеры не содержат полиндромные повторы нуклеотидов, не образуют выраженные вторичные структуры и не имеют протяженных G-C участков, а температуру отжига имеют 55°C для обеих пар олигонуклеотидов. Охарактеризованный способ включает подготовку реакционной смеси путем смешения буфера 10-кратного для ПЦР - 2,5 мкл, дНТФ (25 мМ) - 0,4 мкл, праймеров FIV F, FIV R, FeLV F и FeLV R (15 пмоль/мкл) по 1 мкл, Taq полимеразы (5 ед./мкл) - 0,2 мкл, MgCl2 (50 мМ) - 1,5 мкл, бидистиллированной воды - 11,4 мкл и пробы ДНК - 5 мкл, при этом амплификацию проводят в следующем режиме: тотальная денатурация 95°C - 3 мин, цикл денатурация (95°C - 20 или 60 сек) - отжиг (55°C - 20 или 60 сек) - элонгация (72°C - 40 или 60 сек), причем цикл денатурация-отжиг-элонгация повторяется 35 раз, заключительная элонгация 72°C - 5 мин, хранение 4°C - 10 мин, а детекция полученных результатов осуществляется методом электрофореза в 1,5%-ном агарозном геле. По наличию или отсутствию амплифицируемых фрагментов нуклеотидных последовательностей длиной 397 п.н. для FIV (feline immunodeficiency virus) и 221 п.н. для FeLV (feline leukemia virus) судят о наличии или отсутствии вирусов в организме кошки. Изобретения могут быть использованы в научных исследованиях для обнаружения генетического материала вирусов иммунодефицита - FIV и лейкемии FeLV кошек методом мультиплексной полимеразной цепной реакции (ПЦР) в крови животных. 2 н.п. ф-лы, 3 ил., 3 табл.
Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к паре синтетических олигонуклеотидных праймеров, применяемых для выделения ДНК провируса и РНК вируса иммунодефицита кошек, и к способу диагностики вирусного иммунодефицита кошек с использованием данных праймеров. Пара праймеров имеет следующую структуру - PF: 5′-TGGAGAAGGGAATTTCAGATGGG-3′ и PR: 5′-TTTGGGTCAAGTGCTACATATTGTGG-3′. Способ включает проведение ПЦР с детекцией полученных результатов методом горизонтального электрофореза в 1,5%-ном агарозном геле. Амплификацию проводят в следующем режиме: тотальная денатурация при 95°С в течение 5 мин, цикл денатурация при 95°С в течение 20 или 60 сек, отжиг при 56°С в течение 20 или 60 сек, элонгация при 72°С в течение 40 или 60 сек. Цикл денатурация - отжиг - элонгация повторяется 35 раз. Проводят заключительную элонгацию при 72°С в течение 5 мин. В случае наличия амплифицируемого фрагмента нуклеотидной последовательности длиной 366 п.н. судят о наличии FIV в организме кошки. Предложенное изобретение позволяет провести диагностику вирусного иммунодефицита кошек с высокой эффективностью. 2 н.п. ф-лы, 6 ил., 3 табл., 3 пр.
