Патенты автора АЛЛЕН Фабрис (FR)
Изобретение относится к способу количественного определения пептидогликанов (PGN) в образце полимера глюкозы. Способ включает a) обработку образца полимера глюкозы посредством ультразвука, нагревания и/или ощелачивания для фрагментации и разрушения содержащихся в образце PGN и для образования растворимых PGN с размерами между 30 и 5000 кДа; b) приведение обработанного образца в контакт с рекомбинантной клеткой, экспрессирующей экзогенный рецептор TLR2 (Toll-подобный рецептор 2) и репортерный ген при прямой зависимости от сигнального пути, связанного с рецептором TLR2, причем указанный репортерный ген кодирует секретируемую щелочную фосфатазу; c) измерение сигнала репортерного гена и d) определение количества PGN в образце с применением калибровочной кривой на основе зависимости количества PGN от интенсивности сигнала репортерного гена, где калибровочную кривую зависимости количества PGN от интенсивности сигнала репортерного гена стандартизируют или калибруют с использованием трихлоргидрата PAM3Cys-Ser-(Lys)4. Предложен также набор для количественного определения пептидогликанов (PGN) в образце полимеров глюкозы. Набор содержит трихлоргидрат PAM3Cys-Ser-(Lys)4; рекомбинантную клетку, экспрессирующую экзогенный рецептор TLR2 и репортерный ген при прямой зависимости от сигнального пути, связанного с рецептором TLR2, причем указанный репортерный ген кодирует секретируемую щелочную фосфатазу; и либо калибровочную кривую на основе зависимости количества PGN от интенсивности сигнала репортерного гена, либо стандарт PGN, предпочтительно полученный из бактерии, выбранной из Staphylococcus aureus, Micrococcus luteus, Bacillus subtilis и Alicyclobacillus acidocaldarius, предпочтительно из Staphylococcus aureus, Micrococcus luteus и Alicyclobacillus acidocaldarius; необязательно инструкции по применению и раствор для предварительной обработки образца. 2 н. и 8 з.п. ф-лы, 8 ил.
Настоящее изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для обнаружения контаминантов полимеров глюкозы. Для этого проводят анализ воспалительного ответа in vitro с применением клеточной линии, которая представляет собой клеточную линию либо макрофагов, либо дифференцируемую в макрофаги, либо клетку, экспрессирующую один или несколько толл-подобных рецепторов (TLR) или NOD-подобных рецепторов, выбранных из TLR2, TLR4 и NOD2. Анализ содержит этапы: (a) размещение макрофагов в присутствии препарата полимеров глюкозы, которые могут содержать провоспалительные контаминанты, и измерение продуцирования цитокина RANTES, причем продуцирование цитокина RANTES указывает на то, что препарат содержит контаминанты, способные к инициации воспалительной реакции, и (b) размещение клеточной линии, которая позволяет обнаружить активность рецептора врожденного иммунитета или нескольких рецепторов врожденного иммунитета, выбранных из TLR2 и NOD2, в присутствии препарата и обнаружение сигнала репортерного гена, связанного с этим рецептором, причем обнаружение данной активности или данного сигнала указывает на присутствие в препарате контаминанта, который представляет собой агонист рецептора. Использование данного способа позволяет обнаружить контаминанты полимеров глюкозы, причем добавление компонентов, таких как MDP или LPS, в тестируемый образец позволяет действовать синергично с контаминантами, что повышает чувствительность и понижает порог обнаружения, при этом синергитический ответ отмечен для RANTES. 27 з.п. ф-лы, 5 пр., 23 ил., 5 табл.
