Патенты автора Титова Светлана Викторовна (RU)
Способ моделирования биоплёнок, формируемых Vibrio cholerae 01 серогруппы на поверхности хитина // 2685878
Изобретение относится к медицинской микробиологии. Описан способ моделирования биопленок, формируемых Vibrio cholerae 01 серогруппы на поверхности хитина. Способ включает использование хитина для формирования биопленки, образуемой клетками V. cholerae, с последующей инкубацией и анализом результатов в ПЦР. В качестве хитина используют пластины речного рака Astacus astacus в количестве 10-15 штук и размером 0,3×0,3 см, которые размещают во флакон емкостью 100 мл, содержащий 30 мл отстоенной речной воды. Флакон автоклавируют 10 минут при 120°С, а после охлаждения во флакон вносят взвесь культур Vibrio cholerae 01 серогруппы до конечной концентрации 104 м.к./мл. Инкубирование проводят при 10°С и 28°С. Анализ результатов образования как простых, так и сложных биопленок V. cholerae проводят в ПЦР с использованием праймеров к INDEL-локусу 1699:VC1699-1 GCTTAGCTATTTTTGGGTATAGGTT,VC1699-2 CGTTCATTTTTACTCAAACAGTCA.При этом атоксигенные штаммы ctx- tcpA- формируют ампликон массой 132 п.о., а токсигенные штаммы ctx+tcpA+ образуют ампликон массой 116 п.о. Таким образом, подтверждают присутствие клеток токсигенного штамма в составе сложной биопленки и способность колонизировать поверхность хитина. 3 з.п. ф-лы, 3 ил., 4 пр.
Изобретение относится к экспериментальной биологии и медицине. Предложен способ получения образцов биопленок холерных вибрионов для исследования методом трансмиссионной электронной микроскопии, включающий культивирование биопленок в суспензии исследуемого штамма на поверхности пленок-подложек субстрата в течение не менее 5 суток при температуре 22°С. Формваровые пленки-подложки размещают на медных опорных сеточках для трансмиссионного электронного микроскопа, которые прикреплены на предметном стекле. Биопленки фиксируют, контрастируют. Субстрат с образцами биопленок высушивают на воздухе, отделяют сетки от предметного стекла и просматривают полученные образцы в электронном микроскопе. Способ обеспечивает получение информативных образцов биопленок холерных вибрионов. 2 з.п. ф-лы, 9 ил., 2 пр.
Способ оценки чувствительности биоплёнок холерных вибрионов к антибактериальным препаратам // 2628098
Изобретение относится к медицинской микробиологии. Предложен способ оценки чувствительности биопленок холерных вибрионов к антибактериальным препаратам, включающий получение биопленки на стекляных цилиндрах. Цилиндры с полученной биопленкой устанавливают на агар в чашке Петри, в середину цилиндра вносят растворы антибактериального препарата в разных концентрациях. Результаты учитывают через 18-20 ч инкубации при 37°С по наличию или отсутствию роста холерных вибрионов в отпечатках цилиндров. Чувствительность биопленки холерных вибрионов к антибактериальным препаратам оценивают по индексу активности, рассчитанному по формуле:
, где ИА - индекс активности антибактериального препарата; МПКч - максимальное значение МПК данного антибактериального препарата для чувствительных штаммов в соответствии с МУК 4.2.2495-09; МПКб - значение МПК данного антибактериального препарата в отношении биопленки исследуемого штамма. Чувствительность биопленки исследуемого штамма прямо пропорциональна индексу ИА. Способ обеспечивает точность оценки чувствительности биопленки штаммов холерных вибрионов к антибактериальному препарату. 2 ил., 4 табл., 2 пр.
Изобретение относится к медицинской микробиологии, а именно к области получения и подготовки образцов проб с водных поверхностей водоемов для проведения бактериологических исследований. Способ отбора проб воды с поверхности водоемов для определения присутствия холерных вибрионов включает спуск устройства для отбора воды с использованием троса на глубину пробоотбора. Одновременно в отведенном месте водоема берут с помощью переносного устройства шесть проб, используя сменные пробоотборники, представляющие собой стеклянные трубки диаметром 5 мм и длиной 7 см для образования биопленок холерных вибрионов. Через 6 дней устройство тросом поднимают и трубки извлекают пинцетом, размещают в отдельные пробирки с 1% пептонной водой, закрывают крышкой и устанавливают в контейнер для транспортирования в лабораторию для бактериологических исследований. Переносное устройство для отбора проб воды включает корпус для размещения в нем пробоотборника, представляющий собой основание в виде диска, выполненного с гнездами диаметром 7 мм под пробоотборники в виде стеклянных трубок в количестве шести штук, и круглую пластину, связанную с основанием вертикальным стержнем, имеющим с двух сторон резьбу, на которой внизу с помощью гаек и колпачка зафиксировано основание, а вверху посредством шайбы и гайки пластина, над которой размещен поплавок, посаженный на втулку, и закреплен колпачком-держателем с отверстием под трос. Основание и пластина для жесткости дополнительно стянуты тремя винтами. Технический результат: повышение эффективности проведения бактериологических исследований. 2 н.п. ф-лы, 5 ил., 6 табл., 3 пр.
Изобретение относится к области медицинской микробиологии и касается способа дифференциации токсигенных и атоксигенных штаммов холерных вибрионов О1 серогруппы по ингибирующей активности. Способ включает стадии: а) смешивают в одной емкости объемом 100 мл стерильную водопроводную воду и клетки двух штаммов холерных вибрионов токсигенных (ctx+tcA+) и атоксигенных (ctx-tcA-) в соотношении 1:1 до конечной концентрации 104 м.к. на мл, пробу инкубируют при 25°С 24, 72 часа или более; б) вносят 0,5 мл жидкости после инкубации в микропробирки объемом 1,5 мл и выделяют ДНК; в) проводят амплификацию ДНК со специфическими праймерами к INDEL-гену cheA, имеющими следующие последовательности
,
г) проводят анализ продуктов амплификации с помощью электрофореза в 10% полиакриламидном геле; д) дифференцируют полученный результат по наличию специфических аллелей для каждого из штаммов - атоксигенных, имеющих размер 193 п.о., и токсигенных -169 п.о., наглядность присутствия которых дает возможность делать вывод о наличии ингибирующей активности или ее отсутствии у исследуемых штаммов. Изобретение позволяет быстро определять способность выживать в водных объектах штаммов холерных вибрионов и может быть использовано для мониторинга вод водоемов на наличие токсигенных штаммов холерных вибрионов и предотвращения холеры. 2 з.п. ф-лы, 1 ил., 2 табл., 3 пр.
Предлагаемое изобретение относится к медицинской микробиологии и касается способа оценки адгезивных свойств холерных вибрионов. Представленный способ включает следующие стадии: а) проводят подготовку монослоя клеток HuTu-80 путем их выращивания в пластиковых флаконах объемом 50 мл, по 100-150 тыс. на 1 мл с последующим трипсинизированием культуры и внесением ее в пенфлаконы с дисками (диски 12,0 X 0,11 SPL Lifesciences) по 50 тыс. клеток в объеме 1 мл; б) готовят бактериальную суспензию штаммов Vibrio cholerae El Tor и Vibrio cholerae O139, которые выращивают на агаре Мартена (рН 7,7) в течение 18 часов, после этого петлей засевают в бульон LB (рН 7,7) и выдерживают в термостате при 37°С в течение трех часов; в) эксперимент проводят в пенфлаконах с дисками, на которых сформировался разреженный монослой HuTu-80, туда добавляют 10 мкл бактериальной суспензии и 1 мл среды DMEM с 5% сыворотки эмбриональной бычьей, до концентрации холерных вибрионов 106 м.к./мл, затем проводят инкубирование в течение 90 минут при 37°С, удаляют питательную среду, дважды промывают монослой раствором Хенкса рН 7,4, фиксируют 5% формалином 1 час, после этого высушивают и окрашивают диски по Романовскому - Гимза 1:5 в течение 40 минут; г) проводят по окрашенным дискам подсчет связанных бактериальных клеток, для этого диски промывают раствором Хенкса рН 7,4, достают из флаконов, высушивают, просматривают под микроскопом и определяют адгезивные свойства холерных вибрионов по числу вибрионов, связавшихся с 100 клетками HuTu-80, и рассчитывают индекс адгезии по формуле
И
А
=
∑
К
Б
100
К
,
где ИА - индекс адгезии, ∑КБ - суммарное количество клеток бактерий, прикрепившихся к одной клетке линии HuTu-80, 100К - 100 клеток линии HuTu-80, оценивают результаты по полученному количественному индексу адгезии, если он больше 20, делают вывод, что исследуемый штамм - высокоадгезивный, от 10 до 20 - среднеадгезивный штамм, меньше 10 - штамм низкоадгезивный. Изобретение может быть использовано в лабораторной диагностике для определения индекса адгезии холерных вибрионов Vibrio cholerae El Tor и Vibrio cholerae O139 (Бенгал). 1 табл., 1 пр.
Группа изобретений относится к области биохимии. Предложен способ и устройство для моделирования образования биопленок холерных вибрионов. Устройство включает ёмкость, снабжено пружинообразным приспособлением из мягкой проволоки, закрученной в виде 10 витков, под углом не менее 10-12° к вертикальной оси, диаметром 17 мм. Пружинообразное приспособление имеет два плеча длиной 70 мм для размещения внутри емкости и его удаления из нее, приспособление выполнено с возможностью установки между витками покровных стекол с размером 20×20×0,6 мм. Способ включает создание биопленки на покровных стеклах. Покровные стекла помещают между витками пружинообразного приспособления внутри емкости. Ёмкость заполняют экспериментальной средой, добавляют в емкость суспензию холерных вибрионов и инкубируют при конечной концентрации холерных вибрионов в n×108 КОЕ/мл с доведением до минимального порога чувствительности 0,1 КОЕ/мл при комнатной температуре. Изобретения обеспечивают повышение производительности и безопасности при осуществлении моделирования биопленок холерных вибрионов. 2 н.п. ф-лы, 4 ил., 1 табл., 3 пр.
