Патенты автора Манухина Мария Сергеевна (RU)
Изобретение относится к биотехнологии, генной инженерии, биохимии, медицине, ветеринарии. Получают синтетическую последовательность ДНК, соответствующую гену, кодирующему белковую последовательность гепаринсвязывающего домена (HBD) из Danio rerio, слитую с последовательностью эритропоэтина (Еро) человека (белок HBD-Epo), спланированную таким образом, чтобы нуклеотидный состав кодонов был оптимизирован для гетерологичной экспрессии в непатогенном лабораторном штамме Е. coli. Этот синтетический ген HBD-Epo фланкируют на 5'-конце сайтом NcoI, а на 3'-конце - сайтом Kpn2I и встраивают в плазмиду pQE6 по сайтам NcoI и Kpn2I. На его основе получают рекомбинантную плазмиду pL610, содержащую искусственный бактериальный оперон рекомбинантного белка HBD-Epo, включающий промоторную область раннего промотора бактериофага Т5, ген рекомбинантного белка HBD-Epo, терминатор транскрипции; бактериальный оперон бета-лактамазы; бактериальный участок инициации репликации типа ColE1, кодирующую рекомбинантный белок HBD-Epo и обеспечивающую его синтез в штаммах Е. coli. Изобретение также включает способ очистки белка HBD-Epo методом ионообменной хроматографии. Изобретение относится к самому рекомбинантному белку HBD-Epo, экспрессионному вектору pL610 и композиции (деминерализованному костному матриксу (ДКМ), содержащему белок HBD-Epo, а также ДКМ, содержащему белок HBD-Epo и ВМР-2), направленной на стимулирование остеогенеза. Изобретение позволяет получать устойчивый очищенный активный белок HBD-Epo, а также HBD-Epo, иммобилизированный на ДКМ, в том числе на ДКМ с костным морфогенетическим белком ВМР-2. Изобретение, кроме того, включает способ специфической индукции регенерации костной ткани, заключающийся в заполнении дефектов костной ткани композицией, состоящей из HBD-Epo, иммобилизированного на ДКМ, в том числе на ДКМ с костным морфогенетическим белком ВМР-2. 6 н. и 1 з.п. ф-лы, 4 ил., 5 пр.
Изобретение относится к генной инженерии, биохимии, биотехнологии и иммунологии. Описано получение синтетических генов D3S, D3E и D3D, оптимизированных для гетерологичной экспрессии в непатогенных лабораторных штаммах Escherichia coli. Указанные гены кодируют рецептор-связывающие домены III белка Ε оболочки вируса клещевого энцефалита (ВКЭ). На основе генов D3S, D3E и D3D получают рекомбинантные плазмиды pDBD2-D3S, pDBD2-D3E и pDBD2-D3D, которые кодируют бифункциональные рекомбинантные белки, различающиеся по аминокислотному составу в позициях 166, 170, 184, 211 и определяющие принадлежность к трем основным генетическим типам вируса. Изобретение также включает штаммы-продуценты химерных белков Е. coli M15 [pREP4, pDBD2-D3S], Ε. coli M15 [pREP4, pDBD2-D3E] и Ε. coli M15 [pREP4, pDBD2-D3D], а также способ иммобилизации, концентрирования и очистки полученных белков на декстрансодержащем сорбенте. Изобретение относится к рекомбинантным белкам DBD2-D3S, DBD2-D3E и DBD2-D3D, предназначенным для использования в качестве антигенов, иммобилизованных в лунках 96-луночного планшета или стрипах, в составе набора диагностических маркеров для выявления антител к ВКЭ в сыворотке крови и ликворе человека методом ИФА, а также к иммуногенной композиции, содержащей иммобилизованные на декстране рекомбинантные белки и направленной на специфическую активацию иммунитета и формирование иммунологической памяти в отношении вируса. Изобретение позволяет получать штаммы-продуценты, обеспечивающие высокий уровень продукции рекомбинантных белковых антигенов DBD2-D3S, DBD2-D3E и DBD2-D3D, с целью последующего использования для иммунопрофилактики ВКЭ, дифференциальной диагностики флавивирусных инфекций и оценки напряженности иммунитета. 7 н. и 7 з.п. ф-лы, 7 ил.
