Патенты автора СЫРКИНА Марина Сергеевна (RU)
Изобретение относится к биотехнологии. Способ получения рекомбинантного белка SAV-RGD, специфически узнающего клетки меланомы человека, предусматривает культивирование в питательной среде штамма Escherichia coli MG1655/pSAV-RGD, получение периплазматической фракции клеток указанного штамма, очистку рекомбинантного белка ионообменной хроматографией с последующей ультрафильтрацией и лиофилизацией. Штамм E. coli MG1655/pSAV-RGD получают трансформацией штамма E. coli MG1655 плазмидой pSAV-RGD, полученной на базе вектора pUC18 и включающей последовательность, кодирующую слитый пробелок SAV-RGD (pro-sav-rgd) под контролем промотора уридинфосфорилазы (Pudp) Е. coli. В процессе культивирования в первые 10 ч осуществляют подпитку 40% раствором глюкозы при скорости подачи 25 мл/час и поддержание глюкозы на уровне 1 г/л, дробно добавляют стерильный раствор пептона 10 г/л, дрожжевого экстракта 5 г/л и ампициллина 100 мг/л, продолжая культивирование в течение 8 ч. Периплазматическую фракцию клеток получают добавлением к суспензии клеток лизирующего буфера, содержащего лизоцим в концентрации 1 г/л, при соотношении объемов лизирующего буфера и суспензии клеток 1:20. Изобретение позволяет получить целевой белок с высокой чистотой, которая составляет не менее 97%. 1 з.п. ф-лы, 15 ил., 2 табл., 8 пр.
