Патенты автора Красавцева Ольга Николаевна (RU)
Изобретение относится к биотехнологии и биофармакологии. Предложен способ получения рекомбинантного пептидогликан-ассоциированного липопротеина (PAL) Legionella pneumophila. Конструируют плазмиду pET22b(+)-PAL длиной 6184 п.н., несущую экспрессионную конструкцию для продукции химерного полипептида, содержащего последовательность, кодирующую белок PAL, слитую на 5’-конце с синтетической последовательностью, кодирующей шесть гистидинов и пептид SUMO. Трансформируют клетки Е. coli BL21(DE3) экспрессионной плазмидной ДНК pET22b(+)-PAL. Культивируют полученный штамм BL21(DE3)-PAL при 37°C с продуцированием белка PAL в течение 3 ч. Очищают белок HIS-SUMO-PAL из растворимой фракции бактериального лизата металл-хелатной хроматографией. Отщепляют пептид HIS-SUMO обработкой SUMO-протеазой с восстановлением нативной структуры белка PAL. С помощью ионообменной и гель-фильтрационной хроматографии получают гомогенный препарат белка PAL. Изобретение обеспечивает получение белка PAL, обладающего 98% чистоты по данным электрофореза и денситометрии, с выходом не менее 300 мг с литра бактериальной культуры без ферментации, который может быть использован при разработке диагностических препаратов для определения легионеллезов. 5 ил., 3 пр.
Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ определения наличия в биологических жидкостях, окружающей среде и продуктах питания бактерий Escherichia coli штамма O157:Н7, включающий дезинтеграцию бактерий ферментативной обработкой и лизис неионным детергентом, адсорбцию на парамагнитных частицах при помощи специфического моноклонального антитела, детекцию антигена бактерий Е.coli O157:Н7 при помощи специфического биотинилированного моноклонального антитела, связывание полученного комплекса с нековалентным коньюгатом ДНК-матрицы с нейтравидином, диссоциацию твердофазного комплекса "антитело-антиген Е.coli O157:Н7 - биотинилированное антитело-коньюгат" добавлением раствора глицин - HCl рН 2.6, ПЦР-амплификацию ДНК-матрицы и выявление наличия бактерий Е.coli O157:Н7 по скорости нарастания флуоресцентного сигнала. Данный способ отличается высокой специфичностью и чувствительностью детекции и может быть использован в ранней диагностике геморрагического колита и санитарно-гигиеническом контроле над наличием его возбудителя. 5 ил., 8 пр.
Изобретение относится к биотехнологии, а именно к последовательности ДНК-аптамеров. Указанный ДНК-аптамер связывается с шига-токсином типа 2 и представляет собой одноцепочечную ДНК AptStx2B17 длиной 81 нуклеотид и молекулярной массой 27 кДа. ДНК-аптамер специфически связывает В-субъединицу шига-подобного токсина 2 с константой связывания 1,7·109 М-1 и первичной последовательностью CATACGTTCGACTGCTACCTTAGCCTGGTCTTATGATGCCTGTTTGATCCTGATGGCTAATATGTGAGATGTACAGACTAG. Последовательность ДНК-аптамера отобрана в результате раундов позитивной селекции в отношении рекомбинантного белка В-субъединицы шига-токсина типа 2 на основе системы магносепарации с отделением белка-мишени, аффинно связанного со специфичными аптамерами, из состава химерного полипептида посредством расщепления химерного конструкта по сайту, содержащему субстрат протеазы летального фактора. ДНК-аптамер способен специфически детектировать В-субъединицу шига-подобного токсина 2 по методу ПЦР в режиме реального времени в концентрации до 10-11 г и нейтрализовать его активность по отношению к клеткам перевиваемой линии Vero в концентрации ID50=3 мкМ. Изобретение позволяет с высокой эффективностью детектировать В-субъединицу шига-токсина. 4 ил., 7 пр.
Изобретение относится к биотехнологии, а именно к последовательности ДНК-аптамера. Указанный ДНК-аптамер связывается с бактериями Escherichia coli O157:Н7 и представлен одноцепочечной ДНК O157Flank длиной 81 нуклеотид и молекулярной массой 27 кДа. ДНК-аптамер обладает высокой специфичностью связывания в отношении бактерий Escherichia coli O157:Н7 и имеет первичную последовательность CATACGTTCGACTGCTACTCTGAGTCTGACCTTACAGTCAGTCAATCATGGGACAT ACGAAATGTGAGATGTACAGACTAG. Последовательность ДНК-аптамера отобрана в результате раундов позитивной селекции против бактерий Escherichia coli O157:Н7 и негативной селекции против бактерий других серогрупп Escherichia coli и близкородственных микроорганизмов с использованием тРНК в качестве молекулы-компетитора за связывание. ДНК-аптамер способен специфически детектировать бактерии Escherichia coli O157:H7 в реакции иммуноаптамерной ПЦР в концентрации до 103 микробных клеток на 1 мл раствора. Предложенное изобретение позволяет с высокой эффективностью детектировать бактерии Е. coli O157:Н7. 3 ил., 2 табл., 6 пр.
