Патенты автора Островский Дмитрий Сергеевич (BY)

Изобретение относится к области медицины, а именно к офтальмологии и трансплантологии. Для получения органной культуры трабекулярной сети из кадаверного глаза человека проводят выполнение кругового разреза склеры и сосудистой оболочки, отделение переднего полюса глаза (ПСГ), удаление хрусталика, и разделение ПСГ на части. Донорский кадаверный глаз фиксируют в держателе глазного яблока до достижения тонуса, близкого к тонусу глаза живого человека. Производят скарификацию эпителия с поверхности роговицы и полностью иссекают ткань конъюнктивы. Перед выполнением кругового разреза склеры и сосудистой оболочки осуществляют надрез склеры на расстоянии 2 мм от лимба глубиной не более 0,1 мм. Круговым трепаном диаметром 8 мм производят иссечение и удаление оставшихся слоев роговицы, исключая ее переходную часть в склеру. Затем ножницами производят иссечение склеры и подлежащих тканей по намеченному ранее надрезу, получая в итоге образец трабекулярной сети, включающий ткань трабекулы, радужку и переходную часть роговицы в склеру. Укладывают образец на дно стерильной чашки Петри роговичной стороной вниз и рассекают его меридионально на 4 части. Далее под увеличением микроскопа 20Х производят иссечение радужки в каждой части, оставляя 2 мм ткани у ее корня. Затем полученные части трабекулярной сети помещают в раствор культуральной среды следующего состава: на 10 мл среды 8900 мкл DMEM/F12, 1000 мкл 10% фетальной бычьей сыворотки, 100 мкл 2 мМ L-глутамина, 100 мкл раствора антибиотика-антимикотика, включающего 10000 МЕ/мл пенициллина, 10000 мкг/мл стрептомицина, 25 мкг/мл амфотерицина и культивируют при температуре 37°С, 5% содержании CO2 и влажности 100%. Смену среды производят каждые 3 дня. Способ позволяет повысить достоверность результатов при моделировании состояния in vivo с целью изучения в эксперименте, за счет получения неповрежденной, жизнеспособной ткани трабекулы с сохранением прижизненных функций и с наименьшим количеством окружающих тканей. 1 пр., 1 ил.
Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии и трансплантологии, и может быть использовано для лечения глаукомной оптической нейропатии. Способ включает использование мультипотентных мезенхимальных стволовых клеток (ММСК), которые получают из аллогенных фрагментов лимба кадаверных глаз человека. Из этих клеток создают 3D-клеточные сфероиды по 1000 клеток в каждом сфероиде. В дозе от 250 до 500 сфероидов в 1 мл стерильного 0,9% раствора натрия хлорида вводят парабульбарно однократно. Способ позволяет улучшить и стабилизировать зрительные функции, оказать противоапоптотическое действие, предупредить вовлечение в процесс апоптоза интактных ганглиозных клеток сетчатки за счет длительной и стабильной секреции нейротрофических факторов 3D-клеточными сфероидами ММСК. 2 пр.

Изобретение относится к медицине. После удаления из глазного яблока взрослого донора-трупа роговично-склерального диска глазное яблоко при отсутствии сквозных повреждений радужной оболочки, цилиарного тела и видимой части собственно сосудистой оболочки (ССО) и выхода стекловидного тела за пределы витреальной полости полностью погружают в стерильную емкость со стерильным фосфатно-солевым буфером с рН 7,4. Производят полное отделение склеры от ССО путем рассечения склеры меридиональными разрезами спереди назад на 2, 3 или 4 «лепестка». Со стороны супрахориоидального пространства пересекают вортикозные вены и внутрисклеральную часть зрительного нерва. Производят три разреза хороидально-пигментного комплекса (ХПК), состоящего из ССО и ретинального пигментного эпителия (РПЭ). Первый круговой разрез производят на расстоянии 1 мм от зубчатой линии, один меридиональный разрез - в любом меридиане в направлении от первого разреза спереди назад к культе диска зрительного нерва и второй круговой разрез - на расстоянии 1 мм от культи зрительного нерва. Далее ХПК аккуратно отделяют от нейральной сетчатки пинцетом и укладывают на дно стерильной чашки Петри в положении клетками РПЭ вверх. Добавляют питательную среду следующего состава: среда Игла в модификации Дульбекко со средой Хэма F12 (DMEM/F12) - 89%, эмбриональная телячья сыворотка - 10%, смесь антибиотиков, включающая пенициллин 10000 МЕ/мл, стрептомицин 10000 мкг/мл, амфотерицин 25 мкг/мл - 1%. При этом культуру инкубируют при 37°C и при 5% концентрации СО2, питательную среду заменяют 2 раза в день. Изобретение позволяет снизить степень загрязнения продукта. 2 ил., 1 пр.

Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии и трансплантологии, и касается получения органной культуры собственно сосудистой оболочки глаза (ССО). Для этого удаляют из глазного яблока взрослого донора-трупа роговично-склеральный диск. Затем глазное яблоко осматривают на предмет наличия сквозных повреждений радужной оболочки, цилиарного тела и видимой части ССО, а также выхода стекловидного тела за пределы витреальной полости. При отсутствии перечисленных признаков полностью погружают глазное яблоко в стерильную емкость со стерильным фосфатно-солевым буфером с pH 7,4. Производят полное отделение склеры от ССО путем рассечения склеры меридиональными разрезами спереди назад на 2, 3 или 4 «лепестка» и пересечения со стороны супрахориоидального пространства вортикозных вен и внутрисклеральной части зрительного нерва. Производят три разреза хороидально-пигментного комплекса (ХПК), состоящего из ССО и ретинального пигментного эпителия (РПЭ). Первый круговой разрез производят на расстоянии 1 мм от зубчатой линии, один меридиональный - в любом меридиане в направлении от первого кругового разреза спереди назад к культе диска зрительного нерва. Еще один круговой разрез проводят на расстоянии 1 мм от культи зрительного нерва. Далее ХПК аккуратно отделяют от нейральной сетчатки пинцетом и укладывают на дно стерильной чашки Петри в положении клетками РПЭ вверх. Заливают ХПК 2 мл смеси раствора 0,25% трипсина и раствора Версена в соотношении 1:1 по объему. Инкубируют при 37°C и 5% концентрации CO2 в течение 20 минут. После этого РПЭ отделяют с поверхности ССО струей фосфатно-солевого буфера pH=7,4. ССО переносят в отдельную чашку Петри, несколько раз промывают раствором стерильного фосфатно-солевого буфера pH 7,4. К выделенной ССО добавляют питательную среду следующего состава: среда Игла в модификации Дульбекко со средой Хэма F12 (DMEM/F12) - 89%, эмбриональная телячья сыворотка - 10%, смесь антибиотиков, включающая пенициллин 10000 МЕ/мл, стрептомицин 10000 мкг/мл, амфотерицин 25 мкг/мл - 1%. ССО инкубируют при 37°C и при 5% концентрации CO2. При этом питательную среду заменяют 2 раза в день. Способ обеспечивает снижение степени загрязнения посторонними клеточными элементами получаемой органной культуры ССО. 2 ил.

Изобретение относится к медицине. Для получения культуры клеток ретинального пигментного эпителия (РПЭ) взрослого донора-трупа производят удаление из глазного яблока донора-трупа роговично-склерального диска. При целостности всех частей сосудистой оболочки, глазное яблоко без роговично-склерального диска полностью погружают в емкость с фосфатно-солевым буфером с pH 7,4, производят полное отделение склеры от собственно сосудистой оболочки глаза (ССО) путем рассечения склеры меридиональными разрезами спереди назад на 2, 3 или 4 «лепестка» и пересечения со стороны супрахориоидального пространства вортикозных вен и внутрисклеральной части зрительного нерва, после чего производят три разреза хороидально-пигментного комплекса (ХПК), состоящего из ССО и РПЭ: первый круговой разрез на расстоянии 1 мм от зубчатой линии, один меридиональный в любом меридиане в направлении от первого кругового разреза спереди назад к культе диска зрительного нерва и второй круговой разрез на расстоянии 1 мм от культи зрительного нерва. Далее ХПК аккуратно отделяют от нейральной сетчатки пинцетом и укладывают на дно стерильной чашки Петри в положении клетками РПЭ вверх, заливают 3 мл смеси раствора 0,25% трипсина и раствора Версена в соотношении 1:1 по объему, инкубируют при 37°C и 5% концентрации CO2 в течение 25 минут, после чего РПЭ отделяют с поверхности ССО струей фосфатно-солевого буфера с pH 7,4. Полученную взвесь клеток собирают в пробирку, центрифугируют, сливают надосадочную жидкость, к полученному осадку добавляют питательную среду следующего состава: среда Игла в модификации Дульбекко со средой Хэма F12 - 89%, эмбриональная телячья сыворотка - 10%, смесь антибиотиков, включающая пенициллин 10000 МЕ/мл, стрептомицин 10000 мкг/мл, амфотерицин 25 мкг/мл - 1%. При этом культуру клеток инкубируют при 37°C и при 5% концентрации CO2, питательную среду заменяют каждые 3-4 дня. Изобретение позволяет снизить степень загрязнения культуры клеток. 2 ил., 1 пр.

 


Наверх