Патенты автора Марзанов Нурбий Сафарбиевич (RU)

Группа изобретений относится к области молекулярной генетики и может быть использована в ветеринарной практике и зоотехнике для диагностики четырех аллелей каппа-казеина. Раскрыт способ одновременной генодиагностики четырех мутантных аллелей каппа-казеина у крупного рогатого скота, включающий выделение ДНК из биологического материала, постановку полимеразной цепной реакции в режиме реального времени, с использованием трех реакционных смесей, содержащих 50 мМ KСl, 50 мМ TRIS-HCl, 250 нМ dNTP, 2,5 мМ MgCl2, праймеры - в концентрации 200 нМ, флуоресцентно-меченные олигонуклеотидные пробы - в концентрации 100 нМ, разбавителя, Taq ДНК-полимеразы, трех положительных и одного отрицательного контрольного образца для каждой реакционной смеси. При подготовке к проведению реакции рассчитывают необходимый объем компонентов, исходя из количества исследуемых образцов плюс 4, реактивы смешивают, затем в подготовленные для ПЦР пробирки вносят по 20 мкл приготовленной ПЦР-смеси, в каждую ПЦР пробирку добавляют по 5 мкл контрольных и исследуемых образцов, пробирки помещают в амплификатор, отжиг праймеров проходит на этапе циклирования при 64°С в течение 30 с при числе циклов амплификации, равном 40, анализ полученных данных проводят путем сравнения амплифицированных участков генов, результаты интерпретируют на основании наличия или отсутствия пересечения кривой флуоресценции с установленной на соответствующем уровне пороговой линией. Также раскрыта тест-система для осуществления указанного способа. Группа изобретений обеспечивает возможность диагностики одновременно четырех аллелей; сокращение времени выполнения ПЦР-РВ; снижение трудоемкости; возможность проводить контроль правильности исследования. 2 н.п. ф-лы, 1 ил., 4 табл.

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для диагностики мутантного аллеля, вызывающего короткий позвоночник или брахиспину у крупного рогатого скота. Осуществляют выделение ДНК из биологического материала, постановку полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР-РВ) с использованием реакционной смеси с BY. Затем проводят оценку результатов реакции: BY не обнаружен при положительном значении по каналу Green и отрицательном значении по каналу Yellow, BY обнаружен при положительном значении по каналам Green и Yellow. Изобретение обеспечивает сокращение времени выполнения ПЦР-РВ и возможность проводить контроль правильности исследования. 3 ил., 2 табл., 1 пр.

Изобретение может быть использовано в ветеринарной практике и зоотехнии для диагностики четырех важных аллелей каппа-казеина (κ-CNA, κ-CNB, κ-CNC, κ-CNE). Предложен набор последовательностей праймеров и аллель-специфических зондов для одновременной генодиагностики четырех мутантных аллелей каппа-казеина у крупного рогатого скота путем проведения полимеразной цепной реакции в режиме реального времени, имеющих следующую структуру: 1 ил., 4 табл.

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Способ одновременной генодиагностики двух мутантных аллелей, вызывающих CVM и BLAD у крупного рогатого скота, включает выделение ДНК из биологического материала, постановку полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с использованием реакционной смеси (тест-системы) с CVM/BLAD, содержащей 50 мМKСl, 50 mMTRIS-HCl, 250 нMdNTP, 2,5 мMMgCl2, праймеры - в концентрации 200 нМ, аллель-специфические зонды - в концентрации 100 Нм, имеющие следующие последовательности: CVM_up - gattctcaagagcttaattctaagga, CVM_low - aagtaaaccccagcaaagccac, CVM_Wt - (FAM) aggtctcatggcagttct-(BHQ1), CVM_m - (R6G) catggcatttctcacagcat-(BHQ2), BLAD_up - ttaggcagttgcgttc, BLAD_low - acgttgacgaggtcatccacca, BLAD_Wt - (ROX) accccatcgacctgtacta-(BHQ1), BLAD_m (Cy5) ccatcggcctgtactacct-(BHQ2), разбавитель, 2,5 ед. Taq ДНК-полимеразы, три положительных и один отрицательный контрольных образца. При подготовке к проведению реакции рассчитывают необходимый объем компонентов, исходя из количества исследуемых образцов плюс 4, реактивы смешивают, затем в подготовленные для ПЦР пробирки вносят по 20 мкл приготовленной ПЦР-смеси, в каждую ПЦР пробирку добавляют по 5 мкл контрольных и исследуемых образцов, пробирки помещают в амплификатор, отжиг праймеров проходит на этапе циклирования при 64°С в течение 30 с при числе циклов амплификации равном 40. Анализ полученных данных проводят путем сравнения амплифицированных участков генов, результаты интерпретируют на основании наличия или отсутствия пересечения кривой флуоресценции с установленной на соответствующем уровне пороговой линией. Данные изобретения обеспечивают возможность диагностики одновременно двух мутантных аллелей, вызывающих CVM и BLAD у крупного рогатого скота, способствуют сокращению времени выполнения ПЦР-РВ. 2 н.п. ф-лы, 3 ил., 4 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к набору последовательностей праймеров и аллель-специфических зондов для одновременной генодиагностики двух мутантных аллелей, вызывающих комплекс аномалий позвоночника (CVM) и дефицит лейкоцитарной адгезии (BLAD) у крупного рогатого скота. Набор включает последовательности праймеров и аллель-специфических зондов, которые имеют следующую структуру: CVM_up gattctcaagagcttaattctaagga, CVM_low aagtaaaccccagcaaagccac, CVM_Wt (FAM)-aggtctcatggcagttct-(BHQ1), CVM_m (R6G)-catggcatttctcacagcat-(BHQ2), BLAD_up ttaggcagttgcgttc, BLAD_low acgttgacgaggtcatccacca, BLAD_Wt (ROX)-accccatcgacctgtacta-(BHQ1), BLAD_m (Cy5)-ccatcggcctgtactacct-(BHQ2). Предложенное изобретение позволяет одновременно диагностировать CVM и BLAD у крупного рогатого скота методом ПЦР в реальном времени, а также сократить время выполнения полимеразной цепной реакции в реальном времени. 3 ил., 2 табл., 1 пр.

 


Наверх