Патенты автора Степаненко Родион Николаевич (RU)

Изобретение относится к биотехнологии и медицине, а именно к способу выделения рекомбинантного белка, содержащего в своем составе последовательности миелопептидов и представленного последовательностью SEQ ID NO:1. Плазмидной ДНК pET-32a/REC-MP, несущей ген, представленный последовательностью SEQ ID NO:2, трансформируют компетентные бактериальные клетки штамма Escherichia coli BL21(DE3) для получения растворимой фракции слитого белка тиоредоксин/REC-MP. Далее на металл-аффинном сорбенте с применением носителя Ni-Sepharose осуществляют очистку слитого белка. Затем слитый белок гидролизуют ферментом энтерокиназой-F, инкубируя 1 час при 37°С. Осуществляют денатурацию примесей при нагревании до 74°С в течение 60 мин. Осуществляют FPLC очистку целевого рекомбинантного белка на ионообменном сорбенте с носителем SP-Sepharose и обратнофазовую HPLC очистку на колонке Kromasil 100С18. Изобретение позволяет повысить экспрессию целевого белка до 60-80% от общего объема клеточного лизата, а также повысить эффективность очистки белка, приводящей к однородности и практически к 100% хроматографической чистоте получаемого продукта. 10 ил., 3 табл., 6 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к способу получения рекомбинантного биологически активного пептида на основе пептидов, входящих в состав миелопида. Представленный способ включает трансфекцию клеток Escherichia coli BL21 (DE3) плазмидной ДНК рЕТ30а, несущей ген, представленный последовательностью ATGGGTCGTGGCTTCTTAGGCTTTCCAACTGGCCGTGGTCTGGTGGTGTATCCATGGGGTCGTGGTCTGGTGTGCTATCCGCAAGGTCGTGGCTTCCGTCCACGCATCATGACTCCAGGCCGCGGCTTTCTGGGCTTCCCGACCACTGGTCGTCTCGTTGTGTACCCGTGGACCGGCCGCCTGGTTTGTTACCCACAGACGGGTCGCTTTCGCCCGCGTATTATGACGCCGTAA, кодирующий рекомбинантный белок, культивирование полученного штамма с индукцией экспрессии белка добавлением IPTG, лизирование, включающее обработку клеток ультразвуковым дезинтегратором с получением супернатанта, очистку супернатанта на Q-Sepharose и SP-Sepharose, объединение фракций, содержащих целевой продукт. Предложенный способ может быть использован при производстве и применении лекарственных субстанций на основе смеси биологически активных пептидов. 5 ил., 2 табл., 3 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к получению рекомбинантного белка, содержащего в своем составе последовательности миелопептидов, и может быть использовано для лечения вторичных иммунодефицитов. Рекомбинантный белок (REC-MP) конструируют чередованием коротких активных миелопептидов МП-1 (FLGFPT), МП-2 (LVVYPW), МП-3 (LVCYPQ) и МП-4 (FRPRMTP), перемежающихся сайтами распознавания тромбином и урокиназой. Изобретение позволяет повысить эффективность лечения вторичных иммунодефицитов путем более выраженной стимуляции антителообразования, увеличения количества В-лимфоцитов, экспрессирующих на своей поверхности CD25 и CD69. 4 з.п. ф-лы, 4 ил., 2 табл., 6 пр.

 


Наверх