Патенты автора Поздняков Павел Иванович (RU)
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НУКЛЕОТИДНОЙ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ R(5mC)GY В ЗАДАННОМ ПОЛОЖЕНИИ ПРОТЯЖЕННОЙ ДНК // 2587631
Изобретение относится к биотехнологии и молекулярной генетике. Описан способ определения нуклеотидной последовательности (сайта) 5'-R(5mC)GY-3'/3'-YG(5mC)R-5' в заданном положении протяженной ДНК. Способ включает гидролиз высокоочищенной геномной ДНК метилзависимой сайт-специфической ДНК-эндонуклеазой GlaI, лигирование универсального олигонуклеотидного адаптера с последующей амплификацией в реальном времени с использованием геномного праймера и зонда, комплементарных исследуемой ДНК и гибридного праймера, 3' конец которого комплементарен 3' концу ДНК от заданного места гидролиза GlaI, а оставшаяся часть комплементарна адаптерной последовательности и составление заключения о наличии последовательности R(5mC)GY (где 5mC - 5-метилцитозин, R - А или G, Y - Τ или С) по появлению флуоресцентного сигнала. Адаптерная последовательность - 5'-CCTGCTCTTTCATCG-3'/3'-p-GGACGAGAAAGTAGC-p-5'. Способ проводят в единой реакционной смеси с добавлением состава компонентов, обеспечивающих восстанавление S-S связей в белках, стабилизирующих ферменты и являющихся донором метальных групп. Изобретение упрощает способ определения нуклеотидной последовательности R(5mC)GY в заданном положении протяженной ДНК, расширяет его функциональные возможности и сокращает время анализа. 2 з.п.ф-лы, 2 ил., 2 пр.
