Патенты автора Барлев Николай Анатольевич (RU)
Изобретение относится к биохимии. Получают химерные белки слияния: GST УСД HDAC6 и GST-PSMA3, путем их экспрессии в клетки E. coli за счет введения в них соответствующих векторов и последующей очистки с помощью аффинной хроматографии на глутатион-сефарозе. Проводят реакции связывания белков из экстракта клеток множественной миеломы до или после сочетанной химиотерапии бортезомибом и доксорубицином с GST-UBD_HDAC6 и GST-PSMA3. Осуществляют смыв связавшихся белков с хроматографического носителя глутатион-содержащим буферным раствором. Обессаливают и концентрируют на микроконцентраторах. Разделяют полученные препараты белков в системе двумерного электрофореза: I направление - изоэлектрическое фокусирование белков на приборе Ettan IPG Phor3 (GE Healthcare), II направление - разделение белков по молекулярным массам в денатурирующем электрофорезе по Лэммли. Пятна, соответствующие отдельным белкам, вырезают из полиакриламидного геля и анализируют их состав. Изобретение обеспечивает повышение эффективности очистки регуляторных короткоживущих белков (как полиубиквитинилированных (GST-UBD_HDAC6), так и подвергающихся убиквитин-независимому протеолизу GST-PSMA3)). Удобство метода состоит еще и в том, что он позволяет манипулировать непосредственно с клеточными экстрактами, минуя стадии дополнительной очистки белков. Изобретение позволяет облегчить диагностику множественной миеломы путем выявления среди короткоживущих регуляторных белков специфических онкомаркеров, характерных для данного заболевания. 2 ил., 1 табл.
