Патенты автора Уфимцева Елена Геннадьевна (RU)

Изобретение относится к области медицины, в частности фтизиатрии, а именно к оценке сбалансированности иммунной, воспалительной и противовоспалительной реакций альвеолярных макрофагов из резецированных участков легких пациентов, больных туберкулезом легких, в зависимости от степени зараженности макрофагов Mycobacterium tuberculosis. Для этого выделяют альвеолярные макрофаги из операционного материала легких, проводят их культивирование в течение 16-18 ч в лунках на покровных стеклах, в ходе которого осуществляют дифференциальную окраску, позволяющую выявлять продукцию альвеолярными макрофагами факторов провоспалительной (IFNγ, TNFα, IL-1β, IL-12, COX-2), микробицидной (АФК, iNOS), противовоспалительной (IL-4, IL-10, FGFb) реакций, определяют интенсивность макрофагальной иммунной реакции по количеству альвеолярных макрофагов в ex vivo культуре, их зараженность микобактериями, затем по доле альвеолярных макрофагов, продуцирующих факторы провоспалительной, микробицидной, противовоспалительной реакций, оценивают интенсивность этих реакций, при сопоставлении которой со степенью зараженности альвеолярных макрофагов микобактериями делают заключение об отклонении от состояния сбалансированности указанных реакций альвеолярных макрофагов. Изобретение обеспечивает определение избыточности или недостаточности реакций альвеолярных макрофагов в ответ на инфекцию микобактериями туберкулеза после проведения курсов химиотерапии и операционного лечения больных туберкулезом легких. 9 ил., 4 табл., 5 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ оценки антимикобактериального действия противотуберкулезных препаратов с использованием биологического материала пациентов, больных туберкулезом легких, включающий забор биологического материала, культивирование в питательной среде, ее замену на свежую питательную среду в контрольной культуре и на такую же питательную среду в опытной культуре, дополнительно содержащую противотуберкулезный препарат, сопоставление роста микобактерий туберкулеза в контрольной и опытной культурах, где в качестве биологического материала используют образцы ткани легкого из операционного материала; получают из него ex vivo культуру альвеолярных макрофагов; культивируют ее в течение 1 суток в питательной среде; заменяют питательную среду на свежую в контрольной культуре клеток и на такую же среду с добавлением противотуберкулезного препарата в опытных культурах клеток, различающихся концентрациями одного и того же противотуберкулезного препарата; продолжают культивирование в течение трех дней; фиксируют клетки на покровных стеклах; окрашивают по методу Циля-Нильсена; проводят цитологический анализ на наличие признаков цитотоксического воздействия противотуберкулезного препарата на альвеолярные макрофаги; определяют доли альвеолярных макрофагов, содержащих микобактерии туберкулеза, от общего числа альвеолярных макрофагов в контрольной и опытной культурах клеток; при отсутствии признаков цитотоксического воздействия противотуберкулезного препарата на альвеолярные макрофаги в опытной культуре, отсутствии микобактерий в альвеолярных макрофагах или снижении доли альвеолярных макрофагов, содержащих микобактерии туберкулеза, в 2 и более раз в опытной культуре относительно контрольной делают положительное заключение об антимикобактериальном действии противотуберкулезного препарата и его минимальной концентрации, достаточной для достижения антимикобактериального эффекта, и при проведении цитологического анализа на наличие признаков цитотоксического воздействия противотуберкулезного препарата на альвеолярные макрофаги учитывают наличие ядра с признаками конденсации хроматина, и/или отсутствие целостности плазматической мембраны, и/или образование апоптозных телец, и/или разрушение клеток до отдельных участков цитоплазмы, и/или появление клеток без ядер; при наличии по меньшей мере одного из них делают заключение о наличии признаков цитотоксического воздействия. Изобретение позволяет сократить срок осуществления способа до 4 дней от момента получения биологического материала, обеспечение условий для оценки действия противотуберкулезных препаратов на микобактерии туберкулеза, находящиеся в альвеолярных макрофагах из операционного материала легких пациента, определение противотуберкулезного препарата и его концентрации, достаточной для достижения антимикобактериального действия на микобактерии пациента при отсутствии цитотоксического эффекта на альвеолярные макрофаги. 1 з.п. ф-лы, 6 ил., 5 табл., 7 пр.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ определения способности микобактерий туберкулеза к размножению в альвеолярных макрофагах пациентов после противотуберкулезной терапии. Способ предусматривает забор образцов ткани легкого из операционного материала, получение из него культур альвеолярных макрофагов ex vivo, фиксирование клеток на покровных стеклах через 12-20 часов и 5-8 дней после начала культивирования и окрашивание образцов по методу Циля-Нильсена. После этого оценивают долю альвеолярных макрофагов, содержащих колонии размножающихся микобактерий, и сравнивают данный показатель, полученный через 12-20 часов после начала культивирования, с показателем, полученным через 5-8 дней после начала культивирования. При повышении в процессе культивирования доли альвеолярных макрофагов, содержащих колонии размножающихся микобактерий, от общего числа альвеолярных макрофагов, содержащих микобактерий, на 10% и более делают заключение о высокой способности микобактерий к активации размножения в альвеолярных макрофагах пациента. При повышении данного показателя менее 10% делают заключение о средней способности микобактерий к активации размножения в альвеолярных макрофагах пациента. При отсутствии в процессе культивирования изменений данного показателя или при его снижении делают заключение о низкой способности микобактерий к активации размножения. Изобретение позволяет повысить точность диагностики туберкулеза. 6 ил., 3 табл., 4 пр.

Изобретение относится к области биохимии. Заявлен способ получения ex vivo культуры альвеолярных макрофагов из операционного материала больных туберкулезом легких для оценки вирулентности М. tuberculosis. Получают клеточную взвесь путем измельчения образца ткани легкого, гомогенизации с помощью протирки через сито с диаметром пор 0.5-2.0 мм, освобождения клеточной взвеси от негомогенизированных остатков путем их пассивного осаждения. Клеточную взвесь центрифугируют 4-5 мин при 800-1200 об/мин и +20-25°С. Культивирование клеток осуществляют в течение 12-20 часов. Также заявлен способ оценки вирулентности М. tuberculosis, отличающийся тем, что в полученной ex vivo культуре альвеолярных макрофагов оценивают долю макрофагов, содержащих микобактерии, от общего числа макрофагов, наличие и долю макрофагов, содержащих колонии размножающихся микобактерий без корд-морфологии роста и с корд-морфологией роста, от общего числа макрофагов, содержащих микобактерии. Изобретение позволяет повысить жизнеспособности клеток в полученной культуре, оценить вирулентность М. tuberculosis применительно к конкретному пациенту, сократить длительность осуществления способа. 2 н.п. ф-лы, 12 ил., 3 табл., 8 пр.

 


Наверх