Патенты автора ВИЛЬЯМС Дэвид Хью (GB)
Предложен способ идентификации предполагаемого жизненно важного гена, необходимого для жизнеспособности в условиях роста в присутствии антибиотика, который кодирует мишень для антибиотика в бактерии. Способ включает создание совокупности мутантных бактерий путем транспозонного мутагенеза с применением двух или более разных активирующих транспозонов (TnAS), причем каждый TnA содержит промотор, такой, что встраивание транспозона в ДНК бактерии приводит к нарушению функции или увеличению транскрипции гена в сайте встраивания или поблизости от него позиционно-зависимым образом. При этом транспозонный мутагенез приводит к уровню встраивания, равному по меньшей мере одному транспозону на 10 пар оснований бактериальной ДНК. Осуществляют выращивание бактерий из указанной мутантной совокупности в присутствии антибиотика в концентрации приблизительно 0,5, приблизительно 1 и приблизительно 2×MIC с получением по меньшей мере трех культур для тестирования. Сравнивают распределение вставок TnA между культурами для тестирования и контроля с целью идентификации сайтов встраивания TnA, расположенных таким образом, что транскрипция жизненно важного гена увеличивается, приводя к гиперэкспрессии продукта жизненно важного гена до уровня, при котором он подавляет действие указанного антибиотика и таким образом изменяет эффект антибиотика в отношении указанной бактерии, тем самым обеспечивая идентификацию предполагаемого жизненно важного гена, необходимого для жизнеспособности в условиях роста, применяемых на этапе выращивания бактерий из мутантной совокупности, и кодирующего мишень для указанного антибиотика у указанной бактерии. 9 з.п. ф-лы, 2 ил.
СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ МИШЕНЕЙ ДЛЯ ДЕЙСТВИЯ АНТИБИОТИКОВ ПРИ ПОМОЩИ КОМПЛЕМЕНТАРНОГО СЕКВЕНИРОВАНИЯ // 2593959
Изобретение относится к биотехнологии. Описан способ идентификации жизненно важного продукта гена, который служит мишенью для антибиотика в бактерии. Способ включает этапы: создания устойчивого к антибиотику мутанта указанной бактерии при помощи способа, включающего этап отбора на основании способности к росту в присутствии указанного антибиотика для получения клона устойчивого к антибиотикам мутанта (мутант AbR); трансформации мутанта AbR: (i) одним или более жизненно важными генами указанной бактерии; и (ii) транспозоном, который при встраивании инактивирует ДНК бактерии, с получением совокупности транспозонных мутантов, которые меродиплоидны по указанному одному или более жизненно важным генам; выращивания бактерий из указанной меродиплоидной совокупности в присутствии различных количеств указанного антибиотика с получением двух или более культур для тестирования; и сравнения распределения вставок транспозонов между культурами для тестирования с целью идентификации предполагаемого жизненно важного гена, служащего мишенью для действия указанного антибиотика в указанной бактерии. Изобретение позволяет идентифицировать мишени-кандидаты для антибиотиков. 11 з.п. ф-лы, 2 ил., 1 пр.
