Патенты автора Тарабановская Наталья Анатольевна (RU)
Изобретение относится к диагностическим методам в медицине и может быть использовано в онкологии для определения циркулирующих опухолевых клеток у больных с целью определения чувствительности циркулирующих опухолевых клеток к химиотерапии и прогнозирования вероятности возникновения гематогенных метастазов при раке молочной железы. Определяют экспрессию на ядросодержащих клетках общего лейкоцитарного маркера CD45, эпителиальных маркеров CD326 (ЕрСАМ) и пан-цитокератина АЕ1/АЕ3 и маркера эритроцитов CD235a (гликофорина А), для этого образец ЭДТА-стабилизированной венозной крови в объеме 9 мл забирают утром натощак, первый мл крови в исследование не берут, далее проводят обогащение популяции циркулирующих опухолевых клеток (ЦОК) с помощью метода негативной селекции, к образцу крови добавляют полистироловые частицы с сорбированными антителами к CD45, CD66b и CD235a (гликофорин А) в концентрации 50 мкл на 1 мл крови и инкубируют при комнатной температуре в течение 20 минут, затем образец разводят 1:1 фосфатно-солевым буфером, наносят на градиент плотности с р равным 1.077 при соотношении 1 часть градиента и 2 части разбавленного образца, далее образцы центрифугируют при 1200g в течение 20 минут, затем удаляют 2/3 верхней фракции и собирают содержимое кольца на границе раздела фаз градиент-плазма, далее полученную клеточную суспензию отмывают в 3 мл фосфатно-солевого буфера, содержащего 5% фетальной бычьей сыворотки, центрифугированием при 300g в течение 10 минут и дважды при 110g по 10 минут, супернатант удаляют, к клеточному осадку добавляют 150 мкл буфера, далее образец делят на две части: неокрашенную контрольную пробу в объеме 50 мкл и окрашенную пробу в объеме 100 мкл, в обе пробы добавляют по 25 мкл фиксирующего буфера PerFix-nc Buffer 1, перемешивают на вортексе и инкубируют в течение 15 минут при 18-25°С, затем добавляют 300 мкл пермеабилизирующего буфера PerFix-nc Buffer 2, перемешивают на вортексе, в пробы немедленно добавляют антитела анти-CD45-АРС-Су7 (клон HI30, мышиные IgG1), анти-CD326(EpCAM)-AF488 (клон 9С4, мышиные IgG2b), анти-пан-цитокератин-АР647 (клон АЕ1/АЕ3, мышиные IgG1) и анти-CD235а(гликофорин А)-РегСР-Су5.5 (клон HI264, мышиные IgG2a) из расчета 5 мкл антител на 106 клеток, инкубируют в темноте в течение 20-30 минут при 18-25°С, далее к образцам добавляют по 3 мл буфера PerFix-nc Buffer 3 и центрифугируют при 300g в течение 6 минут, супернатант удаляют, затем к пробам добавляют по 100 мкл буфера, после чего весь полученный объем образца анализируют на проточном цитометре, одновременно детектируют сигналы флуоресцентных меток: AF488, РегСР-Су5.5, AF647, АРС-Су7 и рассчитывают концентрацию циркулирующих опухолевых клеток на 1 мл цельной крови по следующей формуле. Применение изобретения обеспечивает повышение информативности и чувствительности способа. 2 пр., 2 ил., 2 табл.
Настоящее изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и касается прогнозирования риска развития отдаленных метастазов у больных операбельными формами рака молочной железы с метастазами в регионарные лимфоузлы. Для этого определяют молекулярно-биологические параметры опухоли в образцах тканей молочной железы и оценивают показатели в баллах, учитывая степень вовлеченности в процесс метастазирования регионарных лимфатических узлов (X1), значение маркера пролиферативной активности в опухоли Ki67(%) (Х2); экспрессию рецептора HER-2 (Х3), экспрессию рецепторов эстрогенов (Х4), экспрессию рецепторов прогестерона (Х5), значение химотрипсинподобной активности протеасом в опухолевой ткани (ХПА) (УЕ*103 МЕ/мг белка) (Х6); значения каспазаподобной активности протеасом (КПА) (УЕ*103 МЕ/мг белка) и активности кальпаинов (АК) (УЕ*103 МЕ/мг белка) в опухолевой и неизмененной ткани, коэффициент каспазаподобной активности протеасом (кКПА) (Х7), и коэффициент активности кальпаинов (кАК) (Х8). Определяют значение уравнения логистической регрессии Y:
вероятность развития гематогенных метастазов Р определяют по формуле (2):
где е - математическая константа, равная 2,72. При Р≥50% определяют высокий, а при Р<50% - низкий риск развития отдаленных метастазов. Способ обеспечивает высокую точность диагностики за счет учета вовлеченности в патологический процесс указанных патогенетических факторов. 2 пр.
Изобретение относится к медицине, онкологии, в частности к радионуклидной диагностике, и может быть использовано для диагностики рака молочной железы с гиперэкспрессией Неr2/nеu. Пациенткам вводят радиофармпрепарат на основе меченных технецием-99m рекомбинантных адресных молекул DARPinG3, изготавливаемый непосредственно перед введением, для этого в асептических условиях 500 мкл элюата 99mТсO4- 4 ГБк с помощью шприца добавляют в набор для приготовления трикарбонильного технеция и инкубируют при температуре 100°С в течение 30 минут, после инкубации 1 мл трикарбонильного технеция добавляют к 1200 мкг раствора DARPinG3 и инкубируют при температуре 40°С в течение 60 минут, в дальнейшем выполняют очистку полученного соединения от белковых примесей и несвязавшихся с технецием молекул DARPinG3 с использованием очистительных колонок NAP5, полученный после очищения препарат с активностью 400-500 МБк разбавляют в 10 мл физиологического раствора, забирают через стерилизующий фильтр и медленно вводят пациенту, далее через 2 часа после введения препарата пациенту выполняют однофотонную эмиссионную компьютерную томографию на двухдетекторной гамма-камере и оценивают полученные результаты, и при визуализации участков гиперфиксации РФП в ткани молочных желез и регионарных лимфатических узлов диагностируют злокачественную опухоль. Достигается повышение специфичности, информативности, доступности при снижении осложнений. 2 пр., 3 ил.
Способ радионуклидной диагностики операбельного рака молочной железы с гиперэкспрессией Her2/neu // 2702294
Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии и лучевой радионуклидной диагностике, и может быть использовано для диагностики операбельного рака молочной железы с гиперэкспрессией Her2/neu. Вводят инъекционную форму радиофармпрепарата на основе меченных технецием-99m рекомбинантных адресных молекул DARPin9_29, который изготавливают непосредственно перед введением. Для чего в асептических условиях 1 мл элюата 99mTcO4- 7 ГБк с помощью шприца добавляют в набор для приготовления трикарбонильного технеция и инкубируют при температуре 100°С в течение 30 минут. После инкубации 1000 мкл трикарбонила технеция добавляют к 334 мкл DARPin9_29 при концентрации раствора основного вещества 3,6 мг/л и инкубируют при температуре 40°С в течение 60 минут. Далее выполняют очистку полученного соединения от белковых примесей и несвязавшихся с технецием молекул DARPin9_29 с помощью очистительных колонок. Полученный после очищения препарат в дозе 500 МБк разбавляют в 10 мл физиологического раствора и через стерилизующий фильтр медленно вводят пациенту. Через 4 часа после введения препарата пациенту выполняют однофотонную эмиссионную компьютерную томографию на двухдетекторной гамма-камере. Оценивают полученные результаты и при визуализации участков гиперфиксации РФП в ткани молочных желез диагностируют злокачественную опухоль. Технический результат обеспечивает повышение специфичности, информативности и доступности диагностики операбельного рака молочной железы с гиперэкспрессией Her2/neu. 2 ил., 2 пр.
Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ прогнозирования риска плохого ответа опухоли на неоадъювантную химиотерапию (НАХТ) у пациенток с инвазивной карциномой молочной железы, отличающийся тем, что рассчитывают значение параметра Y в уравнении регрессии по формуле Y=-4,88+10*X1-32,36*X2+6,81*X3+38,28*X4, где X1 – степень злокачественности: Х1=1 при низкой, X1=2 при умеренной, Х1=3 при высокой степени злокачественности; Х2 – состояние менструальной функции пациентки: Х2=1 при сохранении менструальной функции, Х2=2 при менопаузе; Х3 – пороговое значение циркулирующих опухолевых клеток (ЦОК) без признаков эпителиально-мезенхимального перехода (EMT) до начала лечения: Х3=0 при содержании клеток с фенотипом EpCam+CD45-CD44-CD24-Ncadherin- менее 0,19 кл./мкл, Х3=1 при содержании клеток с фенотипом EpCam+CD45-CD44-CD24-Ncadherin- более или равно 0,19 кл./мкл; Х4 – пороговое значение ЦОК с признаком EMT до начала лечения: Х4=0 при содержании клеток с фенотипом EpCam+CD45-CD44-CD24-Ncadherin+ менее 0,24 кл./мкл, Х4=1 при содержании клеток с фенотипом EpCam+CD45-CD44-CD24-Ncadherin+ более или равно 0,24 кл./мкл; далее значение вероятности риска плохого ответа на неоадъювантную химиотерапию Р определяют по формуле Р=eY/(1+eY), где е – математическая константа, равная 2,72, и при вероятности Р≥0,5 определяется высокий, а при вероятности Р<0,5 – низкий риск плохого ответа на неоадъювантную химиотерапию. Изобретение обеспечивает повышение точности и информативности прогноза. 2 пр., 3 табл.
Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и касается прогнозирования гематогенного метастазирования при инвазивной карциноме неспецифического типа молочной железы. Для этого проводят определение различных популяций циркулирующих опухолевых клеток (ЦОК) до лечения пациента. Методом многоцветной проточной цитометрии определяют уровень популяций ЦОК с помощью молекулярной панели маркеров, включающей EpCam, CD45, CD44, CD24 и N-Cadherin, и меченных разными флюорохромами моноклональных антител против данных маркеров. Оценивают в баллах следующие показатели: наличие порогового уровня ЦОК с признаком стволовости и ЕМТ до биопсии; наличие порогового уровня EpCam-отрицательных ЦОК с признаками стволовости в состоянии ЕМТ до биопсии; наличие порогового уровня ЦОК без признаков стволовости в состоянии ЕМТ до биопсии, а также определяют размер первичной опухоли. Полученные данные обрабатывают методом математического анализа с использованием уравнения регрессии, разработанного заявителем. И при значении вероятности развития метастазов Р≥50% определяют высокий риск развития гематогенных метастазов у указанной категории пациентов, а при P <50% - низкий риск. Изобретение позволяет повысить точность и информативность прогноза до лечения заболевания. 5 ил., 2 табл., 2 пр.
Изобретение относится к области медицины, конкретно к онкологии, и касается способа прогнозирования исхода люминального В и трижды негативного рака молочной железы у пациенток, не получавших в неоадъювантном режиме химио- или гормонотерапию. Способ включает биохимическое исследование биологического материала пациентов, определение молекулярно-биологических параметров опухоли: экспрессию рецепторов прогестерона, экспрессию рецептора HER-2/neu, также дополнительно исследуют ткань опухоли и прилежащую к опухоли условно неизмененную ткань, в которых флюориметрическим методом измеряют каспазаподобную активность протеасом. Затем определяют коэффициент каспазаподобной активности протеасом (кКАС), который рассчитывают как отношение соответствующей активности в опухолевой ткани к активности в неизмененной ткани, и при значении коэффициента каспазаподобной активности протеасом кКАС более 2,19 прогнозируют неблагоприятный исход с высокой вероятностью развития отдаленных метастазов, а при значении кКАС менее 2,19 прогнозируют благоприятный исход заболевания с низкой вероятностью развития отдаленных метастазов опухоли. Изобретение обеспечивает повышение специфичности и информативности способа прогнозирования исхода люминального В и трижды негативного рака молочной железы. 2 ил., 4 пр.
Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии, и предназначено для персонализированного назначения неоадъювантной химиотерапии (НАХТ) больным люминальным В раком молочной железы. До начала лечения осуществляют забор биопсийного материала опухоли, в котором проводят микрочиповое исследование ДНК с определением маркеров: делеции локусов генов ABCB1-7q21.1, АВСВ3-6р21.32, АВСС1-16р13.1, ABCG2-4q22, MVP-16p11.2; делеции 18p11.21; делеции 11q22.1-23.3; амплификацию 1q24.1-43. Пациентам, в опухолевой ткани которых не обнаружено ни одного из указанных маркеров, начинают лечение с хирургического вмешательства в объеме радикальной мастэктомии или органосохраняющей операции. Пациентам, у которых обнаружен хотя бы 1 из указанных маркеров, до хирургического вмешательства выполняют НАХТ. Изобретение обеспечивает увеличение эффективности НАХТ, адекватное планирование лечения в адъювантном режиме и улучшение отдаленных результатов. 4 пр.
