Патенты автора Утанова Гуля Хайлятдиновна (RU)
Изобретение относится к области биотехнологии, молекулярной биологии, молекулярно-генетической диагностики вирусных болезней животных. Описан способ выявления ДНК провируса лейкоза и иммунодефицита крупного рогатого скота методом мультиплексной ПЦР. Также описан набор для осуществления этого способа, содержащий две пары прямых и обратных олигонуклеотидных праймеров для выявления провирусов энзоотического лейкоза и иммунодефицита крупного рогатого скота. Предложенная группа изобретений может быть использована в научных исследованиях и ветеринарии. 2 н.п. ф-лы, 5 ил., 3 табл., 2 пр.
Изобретение относится к биохимии. Описан набор для выявления ДНК провируса иммунодефицита крупного рогатого скота (BIV (bovine immunodeficiency virus)), содержащий пару специфичных праймеров и ДНК-зонд, методом ПЦР в режиме реального времени. Праймеры и зонд имеют следующий нуклеотидный состав (5′-3′-): pf - TAGGGTAGTGGGATCTCAGAAATC, pr - ACATCCGTAACATCTCCTACCATC, z - GAGGATGGTAGGAGATGTTACGGAT. В качестве источника флуоресценции на 5′ конце зонда применяют краситель ROX, а для тушения флуоресценции на 3′ конце BHQ2. Также описан способ диагностики BIV методом ПЦР в режиме реального времени с использованием набора по п. 1. Реакционную смесь готовят путем смешения буфера 10-кратного для ПЦР - 2.5 мкл, дНТФ (25 мМ) - 0,2 мкл, праймеров pf и pr (10 пмоль/мкл) по 1 мкл, зонда z (10 пмоль/мкл) - 0,5 мкл, Taq полимеразы (5 ед./мкл) - 0,2 мкл, MgCl2 (50 мМ) - 2 мкл, бидистиллированной воды - 7,6 мкл, а амплификацию проводят в следующем режиме: денатурация 95°С - 5 мин, циклирование: денатурация (95°С - 20 с) - отжиг (55°С - 20 с) - элонгация (72°С - 20 с), причем цикл денатурация - отжиг - элонгация повторяется 10 раз, циклирование 2 с детекцией: денатурация (95°С - 20 с) - отжиг (55°С - 20 с) - элонгация (72°С - 20 с), причем цикл денатурация - отжиг - элонгация повторяется 25 или 30 раз. Флуоресценцию измеряют по каналу Orange при температуре 55°С. Пересечение кривой флуоресценции линии threshold, установленной на уровне 30% от максимального уровня флуоресценции в последнем цикле амплификации, свидетельствует о наличии в образце провируса BIV, причем, чем меньше значение показателя «Ct», тем выше количество провируса BIV в исследуемом образце, в то время как отсутствие пересечения кривой флуоресценции линии threshold свидетельствует об отсутствии провируса BIV в образце. Изобретение может быть использовано в научных исследованиях для обнаружения генетического материала BIV в лимфоцитах крови животных методом ПЦР в режиме реального времени. 2 н.п. ф-лы, 6 ил., 3 табл., 2 пр.
