Патенты автора Сарбаева Наталья Николаевна (RU)
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДЕРМАЛЬНОГО МАТРИКСА // 2694543
Изобретение относится к медицине, а именно к медицинским биотехнологиям, и предназначено для получения имплантационного материала на биологической основе, обладающего регенеративным потенциалом, а также в качестве бионосителя при создании ткане-инженерных конструкций и прототипов органов. Способ получения дермального матрикса включает деэпителизацию лоскута кожи, децеллюляризацию, стерилизацию, упаковку и консервацию, а также контроль качества. При этом исходным сырьем является кожа свиней, из которой выкраивают необходимые по размеру лоскуты, отмывают их, подвергают трехкратному циклу замораживания и оттаивания, после чего на первом этапе проводят деэпителизацию лоскутов в растворах заявленного состава и эффективность деэпителизации оценивают визуально по отсутствию эпителиальных фрагментов на поверхности дермы. На втором этапе для децеллюляризации применяют раздельную трехкомпонентную децеллюляризующую систему заявленного состава до получения целевого показателя содержания липидов, что заключается в их полном отсутствии. После этого лоскуты погружают в раствор ДНК-азы заявленного состава до достижения содержания ДНК в образцах, не превышающего 200 нг/мг. Далее образцы промывают дважды деионизированной водой и трехкратно и трижды фосфатно-солевым раствором рН 7,2-7,4 на шейкере в режиме 250 уд./мин при комнатной температуре, при этом смену промывочных растворов осуществляют каждые 12 часов. Контрольные образцы подвергают морфологическому исследованию, качественный состав дермального матрикса исследуют с применением времяпролетной масс-спектрометрии с ионизацией электроспреем. Достигаемым целевым параметром является удаление основного пула клеточных белков и идентификация в составе матрикса преимущественно матрисомных белков. При достижении целевых параметров дермальный матрикс подлежит химической стерилизации, упаковке и криоконсервации. Изобретение обеспечивает возможность использования шкур животных в качестве исходного сырья при отсутствии потенциальных рисков трансмиссии опасных инфекций. 1 табл.
Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной медицине и биологии, и может быть использовано для оценки биосовместимости имплантируемых изделий. Для этого получают клетки с поверхности имплантируемого изделия для оценки его биосовместимости. Животному после анестезии выполняют средне-срединную лапаротомию, в брюшную полость имплантируют тестируемый образец материала, укладывая его на петли тонкой кишки и укрывая большим сальником, рану послойно ушивают. Через 52 часа выполняют релапаротомию, тестируемый образец материала извлекают, обрабатывают 0.25% раствором трипсина "Gibco" с этилендиаминтетрауксусной кислотой in vitro. Снимают адгезированные клетки, которые затем трижды промывают средой DMEM/F12+HEPES, содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотке и осаждают центрифугированием при 1000 оборотах в минуту, а осадок ресуспендируют эмбриональной телячьей сывороткой. Использование данного способа позволяет получить культуру клеток для комплексной оценки биосовместимости имплантируемых изделий в условиях для взаимодействия макрофагов с тестируемым материалом in vivo и оценить морфо-функциональные показатели клеток после такого взаимодействия в условиях in vitro.
