Патенты автора Строкова Светлана Олеговна (RU)
Изобретение относится к криобиологии и медицине. Для получения мультипотентных стромальных клеток (МСК) из криозамороженных тканей фетоплацентарного комплекса (пуповины, плодной части плаценты, амниона) пуповину и плаценту, полученные в ходе операции кесарева сечения, в течение не более 24 часов транспортируют в культуральную лабораторию, где их нарезают на фрагменты толщиной не более 10 мм и выдерживают в течение 20-25 минут в криопротекторной среде на основе аутоплазмы, полученной из пуповинной крови, либо фосфатно-солевого буфера рН=7,4, дополненного тестированным человеческим альбумином до 15 г/л, содержащей 1,5 моль/л пропандиола и 0,1 моль/л сахарозы. Далее фрагменты ткани подвергают постепенному охлаждению: понижение стартовой комнатной температуры до +4°C со скоростью 10°C/мин, охлаждение до -6°C со скоростью 2°C/мин, инициацию кристаллизации при -6°C, выполнение пошагового охлаждения до температуры -30°C со скоростью 0,3°C/мин, погружение в жидкую фазу азота с температурой -196°C для длительного криохранения. Для размораживания пробирки помещают на водяную баню, нагретую до +37°C, после чего отмывают от криопротектора нагретой до +37°C полной культуральной средой, не содержащей ксеногенных компонентов. Затем из фрагментов пупочного канатика удаляют эпителий и кровеносные сосуды, из фрагментов плаценты удаляют ворсины хориона и хорионический трофобласт, из фрагментов амниона удаляют амниотический эпителий, а оставшуюся ткань (вартонов студень пупочного канатика, строму плодной части плаценты и строму амниона) измельчают с помощью хирургических инструментов в небольшом объеме культуральной среды до получения эксплантов объемом 1-2 мм3, которые переносят в культуральную посуду и получают первичную культуру клеток. Дальнейшее наращивание и характеристику МСК проводят с использованием стандартных культуральных методик. Изобретение позволяет получить культуры МСК из криозамороженных тканей фетоплацентарного комплекса за счет сохранения жизнеспособности клеточного компонента стромы при криоконсервировании ткани без использования ксеногенных и токсичных компонентов сред. 1 табл., 2 пр.
