Патенты автора ХЁГЕ Зимоне (DE)
БЫСТРЫЙ СПОСОБ КЛОНИРОВАНИЯ И ЭКСПРЕССИИ СЕГМЕНТОВ ГЕНА РОДСТВЕННОЙ ВАРИАБЕЛЬНОЙ ОБЛАСТИ АНТИТЕЛА // 2612910
Изобретение относится к биохимии. Описан способ получения антитела, включающий выделение антитела из среды культивирования эукариотической клетки, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело, причем нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело, получают путем амплификации нуклеиновых кислот, кодирующих родственный вариабельный домен, используя в качестве матрицы в полимеразной цепной реакции (ПЦР) одноцепочечные кДНК, полученные из РНК антитело-секретирующей В-клетки, и вставки нуклеиновых кислот, кодирующих вариабельный домен, в эукариотическую экспрессионную плазмиду путем безлигазного клонирования, в котором для вставки используют пул нуклеиновых кислот, кодирующих вариабельный домен соответственно легкой и тяжелой цепей антитела, где В-клетка является отдельной единичной В-клеткой, и где В-клетка и ее потомство за 7 дней их совместного культивирования с питающими клетками, начиная с одной клетки, производят более 20 нг/мл антител выделения сегментов нуклеиновых кислот, кодирующих вариабельные домены антител, и введение выделенных сегментов нуклеиновых кислот в эукариотические экспрессионные плазмиды осуществляется без промежуточного выделения и анализа клональных промежуточных плазмид. Таким образом, в способе согласно изобретению не требуется промежуточное клонирование, выделение и анализ промежуточных плазмид. 7 з.п. ф-лы, 3 табл., 4 пр.
