Патенты автора Галимова Айзиля Айтугановна (RU)

Изобретение относится к биохимии. Описан способ получения специального вида расходных материалов для медико-биологических исследований - маркеров длин фрагментов нуклеиновых кислот (ДНК и РНК маркерных лестниц). Сущность изобретения заключается в наработке фрагментов ДНК и РНК, составляющих лестницу, с помощью реакции амплификации "катящимся кольцом" в варианте рамификации. В качестве матрицы для амплификации используется кольцевая молекула одноцепочечной ДНК требуемого размера L (где L - количество нуклеотидов), которая образуется из синтетического олигонуклеотида размера L путем внутримолекулярного лигирования. Кольцевой продукт лигирования используется в качестве матрицы для отжига и элонгации "затравочного" праймера 1, а присутствующий в реакционной смеси праймер 2 обеспечивает запуск амплификации по типу рамификации. Для реакции полимеризации полинуклеотидной цепи используются ДНК или РНК полимеразы, обладающие цепь-смещающей активностью, амплификацию проводят в изотермическом или квазиизотермическом режиме. При добавлении в реакционную смесь небольшого количества рестриктаз или никаз можно добиться расщепления растущих цепей нуклеиновых кислот по сайтам узнавания данных ферментов, тем самым снизив количество очень протяженных продуктов амплификации в пользу более коротких. Для получения РНК-маркерных лестниц применяются дезоксирибо- и рибонуклеозидтрифосфаты и смесь ДНК и РНК полимераз. Для получения маркерных лестниц с размерами фрагментов, не кратными размеру кольцевой матрицы, используются праймеры с 5'-концевой последовательностью любой требуемой длины и некомплементарной исходной кольцевой матрице. Другим способом получения маркерных лестниц с размерами фрагментов, не кратными размеру кольцевой матрицы, является простое смешивание препаратов, полученных при амплификации кольцевых матриц разного размера. Предлагаемый способ позволяет получать маркерные лестницы в значительном количестве с любым размерным шагом. Они могут быть использованы медицинскими диагностическими лабораториями, лабораториями экспертизы и научно-исследовательскими лабораториями при проведении всех видов гель-электрофоретического анализа нуклеиновых кислот. Использование маркерных лестниц, полученных описанным выше способом, идентично таковому для всех коммерчески доступных маркерных лестниц. 2 н. и 3 з.п. ф-лы, 5 ил., 9 пр.
Мы будем признательны, если вы окажете нашему проекту финансовую поддержку!

 


Наверх