Патенты автора Марьин Максим Александрович (RU)
Настоящее изобретение относится к области биотехнологии и медицины, в частности к штамму гибридных культивируемых клеток Homo sapiens/Mus musculus Hu-C6D7-RBD, продуценту человеческих моноклональных антител, специфичных к RBD домену S белка вируса SARS-CoV-2. Изобретение позволяет расширить арсенал средств пролуцентов человеческих моноклональных антител, специфичных к RBD домену S белка вируса SARS-CoV-2, обладающих вируснейтрализующей активностью, которые могут использоваться для накопления моноклонального иммуноглобулинового сырья с целью последующего изготовления терапевтического препарата. 8 ил., 9 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии. Описан штамм гибридных культивируемых клеток Homo sapiens/Mus musculus 1B9C7, продуцирующий человеческие моноклональные антитела, специфичные к домену ботулиническому токсину типа A (LC BoNT/A) Clostridium botulinum. Штамм депонирован в государственной коллекции патогенных микроорганизмов и клеточных культур “ГКПМ-Оболенск”, коллекционный номер Н-96. Изобретение расширяет арсенал средств для получения моноклональных антител, способных нейтрализовать протеолитическую активность LC BoNT/A, что может быть использовано для последующего изготовления терапевтического препарата. 5 ил., 5 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к способу амплификации нуклеиновых кислот тяжелой и легкой цепи человеческих иммуноглобулинов. Изобретение позволяет снижать вероятность ложноотрицательной амплификации, повышая вероятность успешной амплификации кДНК антител с редко встречающимися аллелями V генных сегментов. 16 ил., 6 пр.
Предложен штамм гибридных культивируемых клеток животных Mus musculus 1E10, продуцент мышиного моноклонального антитела 1Е10, которое специфически связывается с протективным антигеном Bacillus anthracis в области IV домена. Указанный штамм депонирован в «ГКПМ-Оболенск» ФБУН ГНЦ «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» под № Н-89. Предложено мышиное моноклональное антитело 1Е10, нейтрализующее летальный токсин Bacillus anthracis, специфически связывающееся с протективным антигеном Bacillus anthracis в области IV домена. Антитело 1Е10 характеризуется константой равновесной диссоциации 9,1564×10-10 М и представлено двумя идентичными тяжелыми и двумя идентичными легкими цепями, образующими молекулу IgG1, с аминокислотными последовательностями легкой цепи SEQ ID NO: 1 и Fd фрагмента тяжелой цепи SEQ ID NO: 2. Также предложено химерное рекомбинантное моноклональное антитело xi1E10, нейтрализующее летальный токсин Bacillus anthracis, полученное путем замены константных доменов легкой цепи и тяжелой цепи вышеуказанного антитела 1Е10 на аналогичные области иммуноглобулина G1 человека, экспрессируемое в эукариотических клетках линии ExpiCHO-S, специфически связывающееся с протективным антигеном Bacillus anthracis в области IV домена. Антитело xi1E1 характеризуется константой равновесной диссоциации 1,2663×10-9 М и представлено двумя идентичными тяжелыми и двумя идентичными легкими цепями с аминокислотными последовательностями легкой цепи SEQ ID NO: 3 и тяжелой цепи SEQ ID NO: 4. Группа изобретений обеспечивает получение антител с высокоаффинным и высокоспецифичным связыванием с протективным антигеном Bacillus anthracis в области IV домена, имеющим нейтрализующее действие в отношении летального токсина Bacillus anthracis. 3 н.п. ф-лы, 15 ил., 11 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии и представляет собой последовательность ДНК-аптамера, связывающуюся с пептидогликан-ассоциированным липопротеином Legionella pneumophila, представляющую собой последовательность одноцепочечного ДНК-аптамера AptPAL_23 длиной 81 нуклеотид, с молекулярной массой 28 кДа, с первичной последовательностью CATACGTTCGACTGCTACGTGCATTCTTCTCCTGGGGGGGCTGCCGTCTCTACAGGGCATTATGTGAGATGTACAGACTAG, содержащую области для связывания с праймерами длиной 18 нуклеотидов в крайних положениях последовательности, формирующую трехмерную структуру, образующую устойчивые специфичные связи с ПАЛ Legionella, имеющую константу равновесной диссоциации (KD) в отношении ПАЛ не менее 5×10-8 М. Изобретение позволяет детектировать легионеллезный антиген ПАЛ в составе тест-систем в качестве специфической амплифицируемой матрицы. 8 ил., 6 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии. Заявлен штамм гибридных культивируемых клеток животных Mus musculus 1F11PAL – продуцент мышиных моноклональных антител, специфичных к пептидогликан-ассоциированному липопротеину (PAL) Legionella pneumophila. Гибридная клеточная линия 1F11PAL получена путем гибридизации мышиной миеломной линии Sp2/0-Ag14 со спленоцитами гипериммунных в отношении PAL мышей линии BALB/c депонирована в государственной коллекции патогенных микроорганизмов и клеточных культур «ГКПМ-Оболенск» под номером Н-78. Изобретение обеспечивает специфическую детекцию бактерий Legionella pneumophila и может быть использовано в лабораторных биологических и медицинских исследованиях, для получения и производства диагностических тест-систем, способных идентифицировать возбудителей легионеллезов. 4 ил., 4 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен штамм гибридных культивируемых клеток H.sapiens/Mus musculus 8D4E9-Ba-LF, продуцирующий человеческие моноклональные антитела против летального фактора возбудителя сибирской язвы. Штамм депонирован в “ГКПМ-Оболенск”, коллекционный номер Н-79. Продуцируемые антитела способны к нейтрализации летального токсина Bacillus anthracis на клеточной модели in vitro и in vivo при введении лабораторным мышам летального токсина Bacillus anthracis, составленного из рекомбинантных белков протективного антигена и летального фактора, с предшествующей ему пассивной иммунизацией животных заявленными антителами. Введение антител увеличивает выживаемость животных при проведении пассивной иммунизации. Использование изобретения обеспечивает получение моноклональных антител, способных нейтрализовать летальный токсин возбудителя сибирской язвы, что может найти применение далее в качестве пассивной защиты человека при заражении или потенциальном заражении сибирской язвой. 6 ил., 7 пр.
Предложен способ получения рекомбинантного экзопротеина А P. aeruginosa (rEPA). Способ включает получение экспрессионного плазмидного вектора pET-rEPA (SEQ NO: 3), содержащего промоторную последовательность ДНК бактериофага Т7 и последовательности ДНК, кодирующие N-концевую область белкового продукта энхансера трансляции (аминокислотная последовательность MASMT), шесть остатков гистидина, сайт расщепления протеазой SUMO и оптимизированную для трансляции в Е. coli последовательность (SEQ NO: 1), кодирующую рекомбинантный белок rEPA (SEQ NO: 2). Осуществляют продукцию рекомбинантного химерного белка-предшественника в гетерологичной системе экспрессии в электрокомпетентных клетках Е. coli BL21(DE3), трансформированных плазмидным вектором pET-rEPA с получением штамма Е. coli BL-rEPA, при 37°С для обеспечения накопления максимального количества белка-предшественника в растворимой фракции. Проводят лизис бактериальной массы в присутствии 4% Triton Х-100 для сохранения белка-предшественника в растворимой форме. Выделяют белок предшественник с помощью металл-хелатной хроматографии на сорбенте Talon, заряженном ионами Со2+, с последующим отщеплением гексагистидина и пептида SUMO протеазой SUMO из состава полипептида. Отщепленный рекомбинантный белок rEPA доочищают анионообменной хроматографией на сорбенте DEAE-Sepharose и гель-фильтрационной хроматографией на колонке, заполненной Superdex 200, с переводом в конечный буфер со значением рН 7.5, с получением рекомбинантного белка rEPA. Изобретение обеспечивает получение белка с высоким выходом, составляющим 0,25 г с литра бактериальной культуры. 4 ил., 4 пр.
Изобретение относится к биотехнологии и биофармакологии. Предложен способ получения рекомбинантного пептидогликан-ассоциированного липопротеина (PAL) Legionella pneumophila. Конструируют плазмиду pET22b(+)-PAL длиной 6184 п.н., несущую экспрессионную конструкцию для продукции химерного полипептида, содержащего последовательность, кодирующую белок PAL, слитую на 5’-конце с синтетической последовательностью, кодирующей шесть гистидинов и пептид SUMO. Трансформируют клетки Е. coli BL21(DE3) экспрессионной плазмидной ДНК pET22b(+)-PAL. Культивируют полученный штамм BL21(DE3)-PAL при 37°C с продуцированием белка PAL в течение 3 ч. Очищают белок HIS-SUMO-PAL из растворимой фракции бактериального лизата металл-хелатной хроматографией. Отщепляют пептид HIS-SUMO обработкой SUMO-протеазой с восстановлением нативной структуры белка PAL. С помощью ионообменной и гель-фильтрационной хроматографии получают гомогенный препарат белка PAL. Изобретение обеспечивает получение белка PAL, обладающего 98% чистоты по данным электрофореза и денситометрии, с выходом не менее 300 мг с литра бактериальной культуры без ферментации, который может быть использован при разработке диагностических препаратов для определения легионеллезов. 5 ил., 3 пр.
Настоящее изобретение относится к области биохимии, в частности к способу получения слитого химерного рекомбинантного белка fliC:pagN. Для осуществления способа конструируют рекомбинантную плазмиду pETfliCpagN, затем трансформируют клетки Escherichia coli BL21(DE3) указанной плазмидой и культивируют полученный штамм BL-fliCpagN при температуре 37°С. Затем получают периплазматическую фракцию бактерий-продуцентов обработкой клеток лизоцимом в 20% растворе сахарозы с последующим центрифугированием, проводят очистку химерного белка fliC:pagN металл-хелатной, анионообменной и гель-фильтрационной хроматографией с получением гомогенного конечного препарата белка fliC:pagN. Рекомбинантная плазмида pETfliCpagN содержит промотор бактериофага Т7 и несёт последовательности, кодирующие белки fliC, включая лидерную последовательность данного белка, и pagN S.typhimurium, объединенные короткой линкерной последовательностью GSVDSSSGGN, и слитые на 3'-конце с синтетической последовательностью, кодирующей шесть гистидинов. Заявленный способ получения fliC:pagN позволяет синтезировать данный белок в растворимой форме с нативной N-концевой аминокислотной последовательностью, а также с выходом не менее 0,3 г белка с литра бактериальной культуры, обладающего 98% чистоты. 7 ил., 4 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа направленного истощения олигонуклеотидных библиотек в отношении водорастворимых белковых мишеней глутатион-S-трансферазы и стрептавидина. Представленный способ включает подготовку комбинаторной олигонуклеотидной библиотеки в количестве 1015 молекул к отбору, разведение олигонуклеотидов библиотеки до концентрации 1015 молекул на 1 мл, денатурацию олигонуклеотидов при 90°С в течение 10 минут и отжиг олигонуклеотидов при 37°С. Связывание глутатион-S-трансферазы или стрептавидина в количестве 1 мг с подготовленным пулом исходной олигонуклеотидной библиотеки в буферном растворе, содержащем 20 мМ Tris-HCl рН 7,4, 50 мМ NaCl и 5 мМ EDTA, и разделение полученной смеси нуклеиновая кислота/белок-мишень гель-фильтрационной хроматографией на фракции. Изобретение позволяет элиминировать из пула олигонуклеотидов максимально возможное количество аффинных к заданной мишени молекул, а повторение раундов такой селекции гарантирует отсутствие в финальном пуле молекул олигонуклеотидов, имеющих значимую для дальнейшего применения аффинность к мишени. Изобретение может быть применено для получения выскоаффинных аптамеров, применимых в области биомедицины. 7 ил., 7 пр.
Изобретение относится к области биохимии, генной инженерии и биотехнологии, в частности к способу получения рекомбинантной фосфатазы бактериальных липополисахаридов. Данный способ включает синтез оптимизированной для трансляции в E. coli последовательности ДНК, кодирующей белок фосфатазы LpxE F. novicida. Указанная последовательность ДНК представлена на Фиг.1А. Настоящий способ предусматривает последующее конструирование экспрессионного вектора, кодирующего химерный белок-предшественник с N-концевой химеризацией. Указанный белок-предшественник состоит из последовательности мальтоза-связывающего белка, сайта узнавания протеазой фактором Xa, шести гистидинов и фосфатазы LpxE F. novicida. Способ также предполагает получение рекомбинантного белка-предшественника продукцией в E. coli и его выделение и очистку. Указанный способ предусматривает последующее выщепление мальтоза-связывающего белка из состава полипептида и доочистку белка фосфатазы LpxE. Настоящее изобретение позволяет получать рекомбинантную фосфатазу LpxE F. novicida с высоким выходом. 6 ил., 5 пр.
