Патенты автора Вишнякова Полина Александровна (RU)
Изобретение относится к области биотехнологии и регенеративной медицины, а именно к способу получения линии макрофагов с провоспалительными свойствами. Способ получения линии макрофагов с провоспалительными свойствами характеризуется тем, что производят забор крови в пробирки с ЭДТА, кровь разводится раствором фосфатного буфера, содержащего ЭДТА, разведенная кровь наслаивается на раствор фикола и центрифугируется при комнатной температуре, далее отбирается лейкоцитарная пленка, промывается дважды раствором фосфатного буфера, содержащего ЭДТА, после единожды раствором фосфатного буфера, содержащего ЭДТА и бычий сывороточный альбумин БСА (1%), полученный осадок клеток инкубируется с магнитными частицами, содержащими антитела к рецептору CD14, фракция клеток проводится через магнитную колонку и смывается раствором фосфатного буфера, содержащего ЭДТА и БСА, и получают CD14++ моноциты, которые культивируются в среде RPMI с добавлением бычьей сыворотки, L-глутамина, пенициллина, стрептомицина, макрофагального колониестимулирующего фактора, клетки дифференцируются в макрофаги в течение 7 дней, после чего проводят нокдаун генов, при этом олигонуклеотиды, использованные для нокдауна, разводятся в фосфатном буфере, пары олигонуклеотидов отжигаются, далее инкубируются при комнатной температуре, для трансфекции клеток используют липофильный агент Lipofectamine 3000, после добавления липофильных комплексов к клеткам проводят инкубацию 24 часа, далее производят смену среды на RPMI с добавлением бычьей сыворотки, L-глутамина, пенициллина, стрептомицина, через 24 часа после смены среды проводят анализ фенотипа, а также анализ экспрессии провоспалительных генов и получают культуру макрофагов с провоспалительными свойствами, при определенных условиях. Вышеописанный способ позволяет получить клеточную культуру макрофагов со стабильным провоспалительным фенотипом, пригодную для проведения исследований in vivo и in vitro. 2 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии и связано с моделированием у лабораторных животных тяжелого инвалидизирующего заболевания - ювенильного эндометриоза. Для этого гомозиготным самкам мыши линии Balb/c-nude весом 18-20 г пришивают к брюшине со стороны брюшной полости фрагмент очага эндометриоза размером 2×2 мм, полученный от женщин раннего репродуктивного периода, после операции животному вводят подкожно 3 раза в неделю по 100 нг 17-бета эстрадиол, разведенного в касторовом масле, культивирование очага эндометриоза in vivo продолжают в течение двух недель, после чего модель пригодна для исследования методов лечения ювенильного эндометриоза. Изобретение обеспечивает создание адекватной модели ювенильного эндометриоза. 2 пр.
Изобретение относится к биотехнологии, клеточной биологии и медицине, в частности к способу получения трёхмерных клеточных органоидов из плоскоклеточных опухолей органов головы и шеи. Для осуществления указанного способа первичный материал транспортируют из оперативного блока в культуральную лабораторию в срок не более 4 часов при хранении материала при +4°С в транспортной среде. Далее ткань трижды промывают в растворе ЭДТА, затем аналогичным образом в растворе антибиотика-антимикотика, после чего трижды отмывают от реагентов в буферном растворе. Опухолевую ткань максимально полно очищают от окружающих ее тканей перитуморальной области. Для ферментативной диссоциации ткани в течение 60-90 минут при 37°С в условиях постоянного перемешивания на орбитальном шейкере с минимальной скоростью 50 об/мин используют рекомбинантные коллагеназы или рекомбинантный трипсин, либо их комбинацию, дополнительно используют рекомбинантную ДНКазу. Объем диссоциирующего раствора превышает объем материала в 5 раз. Суспензию изолированных из ткани клеток разбавляют буферным раствором в 10 раз и пропускают через нейлоновое сито с размером ячеек 100 мкм. В качестве культуральной среды используют DMEM/F12, либо 199 среду, необходимую для поддержания недифференцированного состояния опухолевых стволовых клеток и предотвращения эпителиально-мезенхимального перехода. В культуральную среду вносят 2% v/v аутогенной плазмы, полученной от донора опухолевой ткани. После культивирования в течение нескольких суток сформировавшиеся органоиды могут быть извлечены для исследования либо перенесены в более вязкий матрикс на основе культуральной среды, содержащей 25% v/v аутогенной плазмы. Настоящее изобретение позволяет получить органоиды из опухолевой ткани органов головы и шеи. 3 ил., 1 табл., 2 пр.
Изобретение относится к области медицины, в частности к акушерству и гинекологии, и предназначено для ранней диагностики цервикальных интраэпителиальных неоплазий (ЦИН). Выявляют патологию шейки матки. Определяют уровень экспрессии маркеров-предикторов с помощью вестерн-блот анализа с детекцией хемилюминисценции и ПЦР в реальном времени. При значениях уровней экспрессии HIF1alpha 0,029, GLUT1 782,9±156,5, IGFBP-3 0,038±0,0076, HK2 36,4, VDAC1 70 диагностируют ЦИН1 (LSIL). При значениях уровней экспрессии HIF1alpha 0,03, GLUT1 1154,2±88,7, IGFBP-3 0,02±0,005, HK2 44,9, VDAC1 87 диагностируют ЦИН2-3 (HSIL). Изобретение обеспечивает эффективную диагностику ЦИН на более ранних этапах. 5 ил., 1 табл., 3 пр.
