Патенты автора ТЁРНЕР Артур Кейт (GB)
Предложен способ идентификации предполагаемого жизненно важного гена, необходимого для жизнеспособности в условиях роста в присутствии антибиотика, который кодирует мишень для антибиотика в бактерии. Способ включает создание совокупности мутантных бактерий путем транспозонного мутагенеза с применением двух или более разных активирующих транспозонов (TnAS), причем каждый TnA содержит промотор, такой, что встраивание транспозона в ДНК бактерии приводит к нарушению функции или увеличению транскрипции гена в сайте встраивания или поблизости от него позиционно-зависимым образом. При этом транспозонный мутагенез приводит к уровню встраивания, равному по меньшей мере одному транспозону на 10 пар оснований бактериальной ДНК. Осуществляют выращивание бактерий из указанной мутантной совокупности в присутствии антибиотика в концентрации приблизительно 0,5, приблизительно 1 и приблизительно 2×MIC с получением по меньшей мере трех культур для тестирования. Сравнивают распределение вставок TnA между культурами для тестирования и контроля с целью идентификации сайтов встраивания TnA, расположенных таким образом, что транскрипция жизненно важного гена увеличивается, приводя к гиперэкспрессии продукта жизненно важного гена до уровня, при котором он подавляет действие указанного антибиотика и таким образом изменяет эффект антибиотика в отношении указанной бактерии, тем самым обеспечивая идентификацию предполагаемого жизненно важного гена, необходимого для жизнеспособности в условиях роста, применяемых на этапе выращивания бактерий из мутантной совокупности, и кодирующего мишень для указанного антибиотика у указанной бактерии. 9 з.п. ф-лы, 2 ил.
