Патенты автора Борисов Михаил Александрович (RU)
Изобретение относится к биотехнологии. Изобретение представляет собой способ получения клеточного продукта инсулин-продуцирующих клеток человека, включающий получение эпителиальных прогениторных клеток из биоптата эпителиальной ткани и их последующую панкреатическую дифференцировку в клетки, способные к глюкозозависимой секреции инсулина, в котором панкреатическую дифференцировку клеток проводят в две стадии в культуральной среде для эукариотических клеток, обеспечивающей концентрацию ионов кальция в пределах от 0,5 мМ до 2,5 мМ: на первой стадии клетки культивируют в течение 4-15 суток в культуральной среде, содержащей, по крайней мере, сыворотку крови - 2-20 объемных %, глутамин - не менее 1 мМ, эпидермальный фактор роста - 1-300 нг/мл, трансферрин - не менее 0,1 мкг/мл, селенит натрия - 0,1-20 нг/мл, ретиноевую кислоту - 0,1-20 мкМ, изопротеренол - 0,1-10 мкМ; на второй стадии клетки культивируют в течение 4-15 суток в культуральной среде, содержащей, по крайней мере, сыворотку крови - 2-20 объемных %, глутамин - не менее 1 мМ, эпидермальный фактор роста - 1-300 нг/мл, трансферрин - не менее 0,1 мкг/мл, селенит натрия - 0,1-20 нг/мл, ретиноевую кислоту - 10 нМ - 20 мкМ, никотинамид - 1-100 мМ, фактор роста гепатоцитов - 1-300 нг/мл, дексаметазон - 0,01-5 мкМ, где культивирование на обеих стадиях проводят при 37°С в присутствии 5% CO2. Группа изобретений включает клеточный продукт инсулин-продуцирующих клеток млекопитающего, а также способ заместительной терапии сахарного диабета с использованием клеточного продукта. Изобретение позволяет упростить технологии получения инсулин-продуцирующих клеток, получить не менее 70% функционально активных инсулин-продуцирующих клеток в клеточной культуре, прошедшей дифференцировку. 3 н. и 11 з.п. ф-лы, 10 табл., 7 пр., 11 ил.
Изобретение относится к области клеточной биологии. Изобретение представляет собой способ культивирования эпителиальных прогениторных клеток слюнных желез человека, включающий: (а) получение эпителиальных прогениторных клеток слюнных желез человека от организма-реципиента; (б) перенос клеток в среду культивирования PCT Epidermal Keratinocyte Medium и культивацию в указанной среде в культуральных флаконах, обеспечивающих адгезию клеток, при 37°C в присутствии 5% CO2 с заменой среды каждые 2-4 суток до достижения клетками монослоя; (в) пассаж клеток с разведением 1:3-1:5, включающий снятие клеток с поверхности культурального флакона раствором трипсина в ЭДТА и перенос в новые культуральные флаконы; (г) дальнейшее культивирование клеток, как описано в (б) с заменой среды каждые 2-4 сутки в ходе культивирования и пассажами по достижении клетками монослоя, как описано в п. (в) с разведением не более 1:2-1:3, где первая замена среды после каждого пассажа производится не позднее чем через 8-24 часа. Изобретение направлено на увеличение числа пассажей эпителиальных прогениторных клеток слюнной железы человека, поддержание их недифференцированного состояния и высокого пролиферативного потенциала в процессе культивирования. 4 з.п. ф-лы, 38 ил., 6 табл., 2 пр..
