Патенты автора Лихтенштейн Анатолий Владимирович (RU)
Изобретение относится к области биохимии. Описан способ сканирования генных мутаций в опухолях человека, включающий амплификацию исследуемого фрагмента гена, плавление дуплексов зондов TaqMan с однонитевыми ампликонами, построение пиков плавления, идентификацию мутаций по асимметрии пиков плавления, отличающийся двунитевым сканированием генных мутаций посредством симметричной ПЦР в реальном времени с двумя зондами TaqMan, используемыми для пост-амплификационного плавления ДНК. Способ позволяет проводить количественные измерения числа копий анализируемого гена в исходном образце ДНК, а также сканировать мутации одновременно в обеих нитях ампликона, что повышает надежность и чувствительность анализа и дает дополнительную информацию о типе мутации. 6 ил., 1 табл.
Изобретение относится к области медицины, а именно к генетике и онкологии, и касается способа выявления генных мутаций BRAF в опухолях человека. Осуществляют амплификацию исследуемого фрагмента гена BRAF посредством асимметричной ПЦР в реальном времени с двумя зондами TaqMan: BRAF-15-sense – 5'-ROX-aggtgattttggtctagctacagtgaaatc-BHQ2 и BRAF-15-antisense – 5'-Су5-acccactccatcgagatttcactgta-BHQ2 и праймерами: прямой – 5'-gagatctactgttttcctttactt, обратный – 5'-ggccaaaaatttaatcagt. Этап отжига праймеров и зондов составляет 2 с, число циклов амплификации - 80-100, концентрация Taq-полимеразы - 0,63 ед., температура отжига праймеров и зондов - 57°С. Далее осуществляют плавление дуплекса зонд-однонитевая ДНК и построение пиков плавления. Идентифицируют мутации по асимметрии пиков плавления. Способ обладает высокой чувствительностью, от 10 до 15 раз превышающей чувствительность прототипа, прост в исполнении, реализуется в течение 2 ч в одной пробирке с однократной регистрацией результатов, снижает риск перекрестного загрязнения образцов. 4 ил.
