Патенты автора Полеева Марина Владимиров (RU)
СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ ШТАММОВ ВИДА VIBRIO PARAHAEMOLYTICUS МЕТОДОМ ПЦР В РЕЖИМЕ РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ // 2644232
Изобретение относится к области биотехнологии и генетической инженерии. Изобретение может быть использовано при экспресс-диагностике представителей вида V. parahaemolyticus.Амплификацию исследуемой ДНК проводят с помощью сконструированных праймеров: vppC For CGG-CAA-GCG-TGG-TTT-GTG-AC, vppC Rev CGT-TGA-TGC-AAC-TTG-CAC-CTT-G, в присутствии специфичногозонда: vppC ProbaA (-ROX-CG-TTC-ACA-ACC-ACC-AAC-AGC-AAC-GAC-TTG-BHQ2-). Зонд содержит в своем составе флуоресцентную метку ROX и гаситель флуоресценции BHQ2. Учет результатов идентификации происходит автоматически на мониторе компьютера в виде кривых и в численных значениях, отражающих уровень флуоресцентного свечения определенной длины волны. Если возникает флуоресцентный сигнал с длинной волны 605 нм, характерный для флуорофора ROX, то делают заключение о наличии в пробе ДНК штаммов вида V. parahaemolyticus. ПЦР проводят в объеме 25 мкл. Реакционная смесь содержит: ТаgДНК-полимераза - 0,5 мкл, 10×dNTP - 0,5 мкл, 5×буфер - 5 мкл, праймер For - 2 мкл, праймер Rev - 2 мкл, зонд - 1,5 мкл, исследуемая ДНК - 5 мкл, деионизированная вода - 8,5 мкл. ПНР реакции проходит с соблюдением следующих этапов: 1 этап - 95,0°С - 15 мин, 2 этап - 94,0°С - 30 сек, 55,0°С - 30 сек, 72,0°С - 30 сек., при этом повтор 2 этапа 35 циклов, 3 этап - 10,0°С – хранение, 4 этап - 55°С - 30 сек учет результатов. 2 з.п. ф-лы, 2 пр., 2 ил.
