Патенты автора Сердюк Иван Юрьевич (RU)
Изобретение относится к биотехнологии. Предложен набор для обнаружения РНК вируса болезни Гамборо, где указанный набор включает олигонуклеотиды, имеющие следующие последовательности: SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2 и SEQ ID NO:3. Изобретение может быть использовано при диагностике болезни Гамборо в научно-исследовательских учреждениях, ветеринарных лабораториях и на предприятиях биологической промышленности. Техническим результатом настоящего изобретения является повышение степени специфичности и чувствительности, а также сокращение времени проведения диагностики при снижении вероятности технологических ошибок во время лабораторных манипуляций за счет удобного формата предложенной тест-системы. 2 н. и 3 з.п. ф-лы, 2 ил., 4 пр.
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии, в частности к тест-системе для обнаружения ДНК особо опасного возбудителя африканской чумы свиней (АЧС). Изобретение предназначено для повышения степени специфичности и чувствительности тест-системы, а также сокращения времени проведения диагностики при снижении вероятности технологических ошибок во время лабораторных манипуляциях. Тест-система для обнаружения ДНК вируса африканской чумы свиней с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени включает пластиковые флаконы и пробирки, термостабильный фермент Tag-полимеразу, буфер для постановки реакции, смесь четырех дезоксинуклеотидтрифосфатов, положительный контроль - рекомбинантную плазмиду, содержащую фрагмент гена vp72 вируса африканской чумы свиней, синтетические олигонуклеотидные праймеры и зонд. Используют синтетические олигонуклеотидные праймеры и флуоресцирующий зонд, комплементарные консервативной области генома вируса африканской чумы свиней района гена vp72 и имеющие следующий нуклеитидный состав:
- прямой праймер,
- обратный праймер,
- флуоресцирующий зонд и взятые при соотношении 1:1:0,5, при этом BHQ1 - темновой гаситель флуоресценции присоединен к 3'-концевому нуклеотиду, а FAM - флуоресцентный краситель присоединен к нуклеотиду С, причем для постановки реакции используют 5-кратный буфер и в качестве отрицательного контроля используют дистиллированную воду. 1 табл., 9 ил.
Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, а именно к средствам диагностики африканской чумы свиней (АЧС). Изобретение позволяет повысить точность обнаружения ДНК вируса африканской чумы свиней методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Способ обнаружения ДНК вируса африканской чумы свиней методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени включает выделение ДНК с использованием контрольных образцов (контроль качества выделения вируса и контроль специфики реакции); амплификацию ДНК с использованием синтетических праймеров и флуоресцирующего зонда, включающую денатурацию при 95°С, циклирование: денатурация - отжиг - элонгация и оценку результата по кривым накопления флуоресцентного сигнала по каждому из заданных каналов. В качестве контроля качества выделения вируса используют рекомбинантную плазмиду с фрагментом гена vp72 вируса африканской чумы свиней. В качестве контроля специфики реакции используют рекомбинантную плазмиду с фрагментом гена здоровых тканей свиньи. Синтетические олигонуклеотидные праймеры и флуоресцирующий зонд, комплементарные консервативной области генома вируса африканской чумы свиней района гена vp72, взяты в соотношении 1:1:0,5 и имеют следующий нуклеотидный состав: SEQ NO 1:5'-CTG-CTC-ATG-GTA-TCA-ATC-3' - прямой праймер, SEQ NO 2:5'-GAT-ACC-ACA-AGA-TCG-CCG-3' - обратный праймер, SEQ NO 3:5'-FAM-CCA-CGG-GAG-GAA-TAC-CAA-CCC-AGT-G-BHQ1-3' - флуоресцирующий зонд, где BHQ1 означает присоединенный к 3'-концевому нуклеотиду темновой гаситель флуоресценции, a FAM - флуоресцентный краситель, присоединенный к нуклеотиду С. Амплификацию проводят при следующем режиме: денатурация при 95°С в течение 90 с, затем циклирование с детекцией, включающей денатурацию при 95°С в течение 15 с, отжиг - 60°С - 30 с и элонгацию - 72°С в течение 4 с. Цикл: денатурация - отжиг - элонгация повторяется 40 раз. Затем накопление флуоресцентного сигнала измеряют по каналам: FAM для специфического сигнала; HEX для сигнала внутреннего контроля; CY5 для сигнала экзогенного внутреннего контроля. Если кривые накопления флуоресцентного сигнала выходят до 36 цикла, то результат реакции считается положительным, а если кривые не пересекают пороговую линию или пересекают ее после 36 цикла, то результат реакции - отрицательный. 1 табл., 9 ил.
