Патенты автора Лохонина Анастасия Вячеславовна (RU)
Изобретение относится к области биотехнологии и регенеративной медицины, а именно к способу получения линии макрофагов с провоспалительными свойствами. Способ получения линии макрофагов с провоспалительными свойствами характеризуется тем, что производят забор крови в пробирки с ЭДТА, кровь разводится раствором фосфатного буфера, содержащего ЭДТА, разведенная кровь наслаивается на раствор фикола и центрифугируется при комнатной температуре, далее отбирается лейкоцитарная пленка, промывается дважды раствором фосфатного буфера, содержащего ЭДТА, после единожды раствором фосфатного буфера, содержащего ЭДТА и бычий сывороточный альбумин БСА (1%), полученный осадок клеток инкубируется с магнитными частицами, содержащими антитела к рецептору CD14, фракция клеток проводится через магнитную колонку и смывается раствором фосфатного буфера, содержащего ЭДТА и БСА, и получают CD14++ моноциты, которые культивируются в среде RPMI с добавлением бычьей сыворотки, L-глутамина, пенициллина, стрептомицина, макрофагального колониестимулирующего фактора, клетки дифференцируются в макрофаги в течение 7 дней, после чего проводят нокдаун генов, при этом олигонуклеотиды, использованные для нокдауна, разводятся в фосфатном буфере, пары олигонуклеотидов отжигаются, далее инкубируются при комнатной температуре, для трансфекции клеток используют липофильный агент Lipofectamine 3000, после добавления липофильных комплексов к клеткам проводят инкубацию 24 часа, далее производят смену среды на RPMI с добавлением бычьей сыворотки, L-глутамина, пенициллина, стрептомицина, через 24 часа после смены среды проводят анализ фенотипа, а также анализ экспрессии провоспалительных генов и получают культуру макрофагов с провоспалительными свойствами, при определенных условиях. Вышеописанный способ позволяет получить клеточную культуру макрофагов со стабильным провоспалительным фенотипом, пригодную для проведения исследований in vivo и in vitro. 2 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии и связано с моделированием у лабораторных животных тяжелого инвалидизирующего заболевания - ювенильного эндометриоза. Для этого гомозиготным самкам мыши линии Balb/c-nude весом 18-20 г пришивают к брюшине со стороны брюшной полости фрагмент очага эндометриоза размером 2×2 мм, полученный от женщин раннего репродуктивного периода, после операции животному вводят подкожно 3 раза в неделю по 100 нг 17-бета эстрадиол, разведенного в касторовом масле, культивирование очага эндометриоза in vivo продолжают в течение двух недель, после чего модель пригодна для исследования методов лечения ювенильного эндометриоза. Изобретение обеспечивает создание адекватной модели ювенильного эндометриоза. 2 пр.
Изобретение относится к биотехнологии, клеточной биологии и медицине, в частности к способу получения трёхмерных клеточных органоидов из плоскоклеточных опухолей органов головы и шеи. Для осуществления указанного способа первичный материал транспортируют из оперативного блока в культуральную лабораторию в срок не более 4 часов при хранении материала при +4°С в транспортной среде. Далее ткань трижды промывают в растворе ЭДТА, затем аналогичным образом в растворе антибиотика-антимикотика, после чего трижды отмывают от реагентов в буферном растворе. Опухолевую ткань максимально полно очищают от окружающих ее тканей перитуморальной области. Для ферментативной диссоциации ткани в течение 60-90 минут при 37°С в условиях постоянного перемешивания на орбитальном шейкере с минимальной скоростью 50 об/мин используют рекомбинантные коллагеназы или рекомбинантный трипсин, либо их комбинацию, дополнительно используют рекомбинантную ДНКазу. Объем диссоциирующего раствора превышает объем материала в 5 раз. Суспензию изолированных из ткани клеток разбавляют буферным раствором в 10 раз и пропускают через нейлоновое сито с размером ячеек 100 мкм. В качестве культуральной среды используют DMEM/F12, либо 199 среду, необходимую для поддержания недифференцированного состояния опухолевых стволовых клеток и предотвращения эпителиально-мезенхимального перехода. В культуральную среду вносят 2% v/v аутогенной плазмы, полученной от донора опухолевой ткани. После культивирования в течение нескольких суток сформировавшиеся органоиды могут быть извлечены для исследования либо перенесены в более вязкий матрикс на основе культуральной среды, содержащей 25% v/v аутогенной плазмы. Настоящее изобретение позволяет получить органоиды из опухолевой ткани органов головы и шеи. 3 ил., 1 табл., 2 пр.
Изобретение относится к медицине, в частности к способу получения инъекционного резорбируемого имплантата для лечения легких форм стрессового недержания мочи и недостаточности собственно соединительной ткани на основе поликапролактона и мультипотентных стромальных клеток пупочного канатика. Способ получения характеризуется тем, что поликапролактон подвергают монолитизации с помощью сверхкритичной флюидной технологии, проводят измельчение монолита поликапролактона и отбирают фракции 100-150 мкм, получают клеточную культуру мультипотентных стромальных клеток человека, соединяют клеточный и матричный компоненты конструкции, переносят поликапролактоновые частицы с адгезированными на них клетками, переносят поликапролактоновые частицы в среду введения и получают имплантат из частиц поликапролактона размером 100-150 мкм в среде введения, состоящей из гипромеллозы, либо карбоксиметилцеллюлозы, либо гиалуроната натрия, либо поливинилпирролидона, либо глицерола, либо их комбинации. Осуществление изобретения позволяет получить биорезорбируемый имплантат для восстановления объема и плотности соединительной ткани стенки органа, обладающего высокой биосовместимостью. 2 н.п. ф-лы, 2 пр., 13 ил.
Изобретение относится к регенеративной медицине и тканевой инженерии. Описан биорезорбируемый сетчатый имплантат на основе алифатических полимерных эфиров и мультипотентных стромальных клеток для пластики стенок малого таза и брюшной полости, состоящий из а) высокопористого матрикса-носителя на основе монофиламентных нитей полидиоксанона, б) клеточной культуры мультипотентных стромальных клеток человека, в) импрегнированного в объем резорбируемой полимерной сетки фибринового геля. Описан способ его получения. На экспериментальной модели подкожной трансплантации биорезорбируемого сетчатого имплантата достигается высокая эффективность замещения собственной соединительной тканью, достаточное время резорбции, минимальное количество побочных эффектов. 2 н.п. ф-лы, 9 ил., 4 пр.
