Патенты автора Брумберг Валентин Андреевич (RU)
Изобретение относится к области медицины, в частности к биомедицине, а именно к регенеративной медицине и трансплантологии, тканевой инженерии для получения бесклеточного матрикса амниотической мембраны для последующей реконструкции дефектов тканей вследствие термических, химических и радиационных ожогов, язв и др. Способ получения бесклеточного матрикса амниотической мембраны для последующей реконструкции дефектов тканей в качестве покрытия с сохранными структурными компонентами внеклеточного матрикса включает следующее: донорскую плаценту переносят в ламинарно-потоковый шкаф II класса биологической опасности, отделяют внутреннюю плодную амниотическую оболочку от хориона, при этом из одной плаценты выделяют примерно 300 см2 амниотической мембраны. Выделенные фрагменты амниона площадью 50 см2 тщательно отмывают от крови в фосфатно-солевом буферном растворе с добавлением 250 ЕД/мл пенициллина и 250 мкг/мл стрептомицина троекратно в течение суток, через каждые 3 часа проводят замену раствора. Затем выделенные фрагменты амниотической мембраны площадью 50 см2 подвергают детергентно-ферментативной децеллюляризации, используя при этом: (1) 0,5% дезоксихолат натрия + 0,5% TritonX100 - 24 ч, 400 об/мин; (2) 0,05% Трипсин-ЭДТА - 1 ч, 200 об/мин; (3) DMEM, 10% FBS, 1% пенициллин-стрептомицина - 24 ч, 400 об/мин; (4) 300 ЕД/мл ДНКазы I, 40 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2, 10 mM NaCl - 16 ч, 400 об/мин; (5) PBS, 1% пенициллина-стрептомицина - 48 ч, 400 об/мин. Далее матрикс анализируют на наличие/отсутствие ядер клеток или теней ядер, сохранность основных компонентов внеклеточного матрикса (коллаген, ламинин, фибронектин) и уровень остаточной геномной ДНК. Технический результат – получение бесклеточного матрикса амниотической мембраны, не вызывающего воспалительного фиброза и макрофагально-лимфоцитарной инфильтрации, с целью заживления пораженной поверхности за счет повышения репаративных и иммунных процессов, восстановления трофики, ремоделирования фиброзной соединительной ткани.
Изобретение относится к области медицины, в частности к биомедицине, и может быть использовано в органной трансплантации и тканевой инженерии для реконструкции дефектов мягких тканей. Способ получения децеллюляризированных кожных лоскутов включает использование перфузионного модуля, интегрируемого в биореактор Ebers Teb 500, собранного из двух резервуаров различного объема, соединенных между собой с помощью трубок и люэр-фиттингов. Лоскут, помещенный в перфузионный модуль, обрабатывается следующим образом: лоскут отмывают путем перфузии 250 мл PBS с добавлением антибиотиков в течение суток; затем кожный лоскут последовательно отмывают в растворах 0,5 М NaCl, 1M NaCl и стерильной очищенной воде. После отмывки кожный лоскут обрабатывают раствором 0,25% трипсин – ЭДТА на платформенном шекере в рабочем пространстве биореактора EBERS ТЕВ 500 или инкубатора при 37°С со скоростью 500-600 об/мин. Далее промывают лоскут последовательно в стерильной очищенной воде и 100% изопропиловом спирте. Затем помещают фиксированный лоскут в перфузионный модуль и проводят перфузию 250 мл свежего профильтрованного раствора 1% 4-(1,1,3,3-тетраметилбутил)фенил-полиэтиленгликоля (TritonX100) и 0,8% дезоксихолата натрия (NaDOC) в течение 45 часов, при этом по истечению 24 часов раствор заменяют на свежий и с целью отмывания от детергентов перфузионный модуль не разбирают, а наливают в осушенный резервуар для перфузата 200-250 мл стерильной воды с добавлением 0,3% азида натрия и 1% ампициллина натрия, перфузию проводят в течение 48 часов с тремя заменами в течение каждых суток. После остановки перфузии лоскут промывают 40% этиловым спиртом, затем снова перфузируют лоскут со скоростью 20 мл/мин в течение двух часов. После перфузии лоскут переносят в новую емкость, заполненную 125 мл 70% этанола на +4°С и хранят в течение суток, а затем лоскут консервируют в 200-250 мл 7,14% DMSO и 7,14% PVP в DMEM и хранят при температуре -80°С. Способ позволяет добиться полного удаления ядер во всех слоях кожи, включая ядра адипоцитов, удаления молекул, являющихся антигенными детерминантами, отсутствия экспрессии МНС-1. 1пр.
Группа изобретений относится к области биохимии. Предложено устройство для двухсторонней децеллюляризации сосудистых графтов различного диаметра и способ оптимизации работы указанного устройства (варианты). Устройство включает проточную вертикальную камеру с тремя резервуарами, систему индикации готовности графтов или аварийных ситуаций, трубки подвода и отвода среды, компоненты для вертикального и горизонтального закрепления графтов в верхнем и нижнем резервуарах. Верхний и нижний резервуары имеют по всем сторонам кроме основания порты для трубок подачи и отвода среды и для контрольно-измерительной аппаратуры, а промежуточный резервуар имеет один порт в крышке и до пяти портов в основании. Способ включает перемешивание жидкости в резервуарах, где устройство или съемное основание нижнего резервуара соединяют проволокой с орбитальным шейкером, либо устройство устанавливают на магнитную мешалку с якорем в нижнем резервуаре, либо магнитную мешалку устанавливают перпендикулярно устройству и используют для вертикальной и горизонтальной ротации закрепленного графта, либо трубку подвода устройства соединяют с выступом вала головки перистальтического насоса для контролируемой ротации графта. Изобретения обеспечивают высокую производительность процедуры тщательной отмывки сосудистых графтов от клеток. 5 н.п. ф-лы, 1 ил.
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДЕЦЕЛЛЮЛЯРИЗИРОВАННЫХ МАТРИКСОВ ПАРЕНХИМАТОЗНЫХ ОРГАНОВ ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ // 2653489
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу получения децеллюляризированных матриксов почек кролика или крыс. Способ получения децеллюляризированных матриксов почек кролика или крыс с помощью метода детергентно-ферментативной децеллюляризации с использованием высокопроизводительной системы перфузии, которая представлена модулем для децеллюляризации, образованным резервуарами для перфузируемого раствора и паренхиматозного органа, системой силиконовых трубок с внутренним диаметром '' и 1/8'', перистальтических трубок с тремя маркированными стопперами для подключения к картриджам насоса Ismatec и системой люэр-фиттингов, который в собранном виде подключается к проточному биореактору EBERS ТЕВ500 MasterUnit, после подключения модуля децеллюляризации к биореактору проводят последовательную перфузию почек растворами определенного состава. Вышеописанный способ позволяет сохранить структурную целостность компонентов экстрацеллюлярного матрикса, а также с содержанием сульфатированных гликозаминогликанов и растворимого коллагена, сопоставимыми с нативными органами, кроме того, полученные децеллюляризированные матриксы могут быть использованы для дальнейших этапов тканевой инженерии, в частности для последующих процедур криоконсервации, стерилизации и рецеллюляризации. 2 пр.
Изобретение относится к области криоконсервации биологического материала, в частности сосудистых аллотрансплантатов. Предлагаемый способ криоконсервации сосудистых аллотрансплантатов включает сверхбыстрое охлаждение аллотрансплантатов до температуры -80 С° и хранение при этой температуре, при этом аллотрансплантаты крепятся на стерильные силиконовые или пластиковые полые подложки с диаметром на 15% меньше внутреннего диаметра сосудов и предварительно охлаждаются до +4°С, а для криоконсервации в качестве хладагента и непроникающего криопротектора применяется полидиметилсилоксан (ПДМС) вязкостью в 1 сСт с температурой -80°С. Охлаждение и замораживание проходит со скоростью -10°С/сек путем погружения и перемещения в объеме ПДМС в течение 1 мин. Для индивидуальной упаковки аллотрансплантатов на подложках используется стерильная пробирка на 50 мл с отверстием на дне и портом в крышке и двух заслонках на концах подложки. Для упаковки 3-х аллотрансплантатов используется промежуточный пластиковый контейнер объемом в 50 мл, имеющий крышку с портом для вакуумизации и с тремя портами для подложек на дне, на одинаковом расстоянии друг от друга, который устанавливается в вертикальном положении в прозрачную емкость из полиакрила объемом в 1 л. Для упаковки 10-ти аллотрансплантатов используют два держателя со сквозными каналами для подложек в горизонтальном положении и прозрачными крышками для закрепления на эти держатели. Хранятся аллотрансплантаты в выбранной упаковке с покрытием ПДМС. Разогрев аллотрансплантатов осуществляют на подложках в объеме ПДМС вязкостью в 25 сСт с температурой +25°С за 5 мин. Для безопасной радиационной стерилизации каждая упаковка с аллотрансплантатами вакуумизируется. Предлагаемый способ криоконсервации донорских сосудистых аллотрансплантатов позволяет избежать образования экстрацеллюлярных кристаллов льда, применения криопротекторов, оказывающих цитотоксическое воздействие на трансплантат, исключить использование программных методов замораживания с применением жидкого азота и обеспечить оптимизацию их дальнейшего процессинга – радиационной стерилизации и децеллюляризации. 1 ил.
